表皮剥脱毒素スーパーファミリーの作用機構に関する研究

表皮剥脱毒素超家族作用机制研究

• 批准号: 15019068
• 负责人: 菅井 基行
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019068/
• 关键词: ETD; 表皮剥脱毒素; デスモグレイン; MRSA; 結晶構造解析; セリンプロテアーゼ

本研究では私どもが新規に見出したetd pathogenicity islandの塩基配列を決定し、表皮剥脱毒素ETDが新生児マウスに表皮剥脱活性、ヒト及びマウス表皮細胞デスモゾーム蛋白Dsg1消化活性を示し、特定の黄色ブドウ球菌クローンがETDを産生することを示した(Infect.Immun.70,5835)。またETBがDsg1を選択的に消化することを明らかにした(J.Invest.Dermatol.118,845)。さらにETA, ETB, ETDがDsg1のカドヘリン-リピートの中のLNVIE-GS(P)VFRC(ハイフンの位置)配列を共通して切断することを明らかにした(J.Clin.Invest.110,53)。また、関西で病院外来で採取した伝染性膿痂疹患者由来の黄色ブドウ球菌臨床分離株を用いて表皮剥脱毒素産生性についての分子疫学調査を行った。その結果、ETA, ETBを産生する株はクローンとして存在すること。またその中に80年代までに認められたコアグラーゼ型とは異なる型が多数派として存在し、それがMRSAであることを明らかにした(J.Infect.Dis.185,1511)。さらにこれを発展させ、伝染性膿痂疹発症黄色ブドウ球菌臨床分離株の全国調査を行った。またDsg1のET切断部位特異的抗体を作成、ETDならびにETD S189C変異体の結晶構造を明らかにした。またS.hyicusが産生するET、ExhB, ExhC, ExhDならびにET-like serine protease ORF2の大量精製に成功し、これらの結晶化を開始した。さらにETと基質Dsg1の結合様式を明らかにするためにはDsg1の大量精製が必須であるが、特定の大腸菌constructのみがバキュロウイルスで発現させたDsg1と同等のET感受性を有することを明らかにし、大腸菌を用いたDsg1の大量精製が可能であることを見い出した。これにより念願のET/Dsg1の共結晶化にチャレンジする道が開けた。

In this study, we found that the new regulation of ETD pathogenicity island determines the base alignment, epidermal exfoliation toxin ETD has epidermal exfoliation activity in neonatal cells, and epidermal cell protein Dsg1 digestion activity, and ETD production in specific yellow bacteria (Infect.Immun.70,5835). ETB Dsg1 J.Invest.Dermatol.118 ETA, ETB, ETD are included in the LNVIE-GS(P)VFRC configuration of Dsg1 (J.Clin.Invest.110,53). Molecular epidemiological investigation of epidermal exfoliation toxin production by clinical isolates of Staphylococcus aureus from patients with infectious impetigo collected from Kansai Hospital The result is ETA and ETB. In the 1980s, the majority of MRSA groups existed, and MRSA groups existed (J.Infect.Dis.185). A national survey of clinical isolates of yellow beetles from infectious impetigo was conducted. ETD S189C and ETD S189C crystal structures were prepared. ET, ExhB, ExhC, ExhD and ET-like serine protease ORF2 were successfully purified and crystallization of these proteins began. Dsg1 must be purified in large quantities, and Dsg 1 must be purified in large quantities, and Dsg1 must be purified in large quantities. The co-crystallization of ET/Dsg1 is desired.