表皮剥脱毒素スーパーファミリーの作用機構に関する研究

表皮剥脱毒素超家族作用机制研究

• 批准号: 16017268
• 负责人: 菅井 基行
• 金额: $ 8.19万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017268/
• 关键词: Exfoliative toxin; デスモグレイン; プロテアーゼ; 表皮; 黄色ブドウ球菌

黄色ブドウ球菌が産生する表皮剥脱毒素(ET)は、新生児、幼児の伝染性膿痂疹患部皮膚に水疱形成、剥脱を引き起こす原因毒素である。ETファミリーは現在血清学的違いによりETA、ETB、ETDの3種類が報告され、Amagai、Stanley、Yamaguchiらの共同研究により、ETファミリーの標的蛋白が表皮細胞間の接着を担うデスモグレイン1(Dsg1)であることが証明された。また同じブドウ球菌属に属するStaphylococcus hyicusが同様の毒素を産生する事が知られており、血清学的に異なる4種類の表皮剥脱毒素ExhA,ExhB,ExhC,ExhDを産生する。この毒素を産生するS.hyicusは幼弱ブタに滲出性皮膚炎を惹起する。本年、私どもはブタのDsg1のクローニングに成功し、バキュロウイルスで発現させたsDsg1を用いてExhの切断活性を調べた所、ExhA〜ExhDがブタDsg1を選択的に切断する事を明らかにした。また精製したExhA〜ExhDを子豚の皮下に接種すると、表皮の痂皮化、剥脱を誘導する事を明らかにした。またExhA,ExhB,ExhDについて1〜2Aの分解能で結晶構造を解いた。これらのExhの構造は既に構造が明らかにされているETに類似していることが明らかになった。また昨年度に大腸菌で発現に成功したヒトDsg1の細胞外ドメインとセリンプロテアーゼ活性基のセリンをアラニンに置換して不活化したETAを用いた共結晶化を試みた。その結果、プロペラ状の針様結晶が得られたが、結晶の増大が見られず、X線を用いた解析には至らなかった。このため、再度、ヒトDsg1の大量精製法について検討し硫安沈殿を行ったヒトDsg1を共結晶化に用いる方法を検討した。また大腸菌で作成したヒトDsg1が温度に感受性である事から、トランスジェニックカイコを用いたヒトDsg1の大量発現を目指して、その予備実験としてカイコ絹糸腺でのヒトDsg1の一過性の発現を試みた。その結果、カイコ絹糸腺でヒトDsg1の発現が認められた。またETとヒトDsg1の会合状態を調べるために、ETAを安定同位体標識し、大腸菌で発現精製したヒトDsg1とともにNMR解析することを試みた。

Yellow ブ ド ウ aureus が produce す る epidermis exfoliative toxins (ET) は, where new, young where の 伝 dyeing pus scab skin rash of に blister forms, stripped を lead き こ で す reason toxin あ る. ET フ ァ ミ リ ー は now serological violations い に よ り ETA and ETB, ETD の 3 kinds が report さ れ, Amagai, Stanley, Yamaguchi ら の joint research に よ り, ET フ ァ ミ リ ー の target protein が の between epidermal cells then を bear う デ ス モ グ レ イ ン 1 (Dsg1) で あ る こ と が proof Youdaoplaceholder0. ま た with じ ブ ド ウ aureus genera に す る Staphylococcus hyicus が with others を の toxins produced す る matter が know ら れ て お り, serological に different な る 4 kinds の epidermis ExhA exfoliative toxins, ExhB, ExhC, ExhD を produce す る. <s:1> toxins を produce する s. hyicus を weak ブタに exudative dermatitis を cause する. This year, private ど も は ブ タ の Dsg1 の ク ロ ー ニ ン グ に successful し, バ キ ュ ロ ウ イ ル ス で 発 now さ せ た sDsg1 を with い て Exh の cut activity を adjustment べ た, ExhA ~ ExhD が ブ タ Dsg1 を sentaku に cut す る matter を Ming ら か に し た. ま た refined し た ExhA ~ ExhD を son dolphin の subcutaneous に vaccination す る と の scab skin, skin, stripped を induced す る matter を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0 ExhA,ExhB,ExhDに て て1 ~ 2A <s:1> decomposition energy で crystalline structure を decomposition た た た. こ れ ら の Exh の tectonic は に structure both が Ming ら か に さ れ て い る ET に similar し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た yesterday annual に coliform で 発 に now successful し た ヒ ト Dsg1 の extracellular ド メ イ ン と セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ active group の セ リ ン を ア ラ ニ ン に replacement し て inactive し た ETA を with い た total crystallization を try み た. そ の results, プ ロ ペ ラ others in crystalline form の needle が have ら れ た が, large crystal の raised が see ら れ ず, X-ray を い た parsing に は to ら な か っ た. こ の た め, again, ヒ ト Dsg1 の large refining process に つ い て 検 for sulfur し AnShenDian を line っ た ヒ ト Dsg1 を total crystallization に with い る method を beg し 検 た. ま た coliform で made し た ヒ ト Dsg1 に が temperature susceptibility で あ る matter か ら, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク カ イ コ を with い た ヒ ト Dsg1 の large 発 を refers now し て, そ の reserve be 験 と し て カ イ コ silk si gland で の ヒ ト Dsg1 の transient の 発 を now try み た. Youdaoplaceholder0 そ results, カ コ コ silk glands でヒトDsg1 are found to be が and められた. Meet ま た ET と ヒ ト Dsg1 の state を adjustable べ る た め に, ETA を stable isotopic logo し, coliform で 発 now refined し た ヒ ト Dsg1 と と も に NMR analytical す る こ と を try み た.

项目成果

Staphylococcus hyicus exfoliative toxin selectively digest porcine desmoglein 1

猪葡萄球菌剥脱毒素选择性消化猪桥粒芯糖蛋白1

• 发表时间: 2005
• 期刊: Microbial Pathogenesis 39
• 作者: Y.Fudaba;et al.
• 通讯作者: et al.

Cloning of swine desmoglein 1 and its direct proteolysis by Staphylococcus hyicus exfoliative toxins isolated from pigs with exudative epidermidis

猪桥粒芯糖蛋白1的克隆及其从渗出性表皮猪分离的猪葡萄球菌剥脱毒素的直接蛋白水解

• 发表时间: 2005
• 期刊: Veterinary Dermatology 16
• 作者: 谷口小百合;他;Koji Nishifuji et al.
• 通讯作者: Koji Nishifuji et al.

Mutation analysis of the residues in the glycylglycine endopeptidase ALE-1

甘氨酰甘氨酸内肽酶 ALE-1 残基的突变分析

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Bacteriology 187-2
• 作者: Y.Fudaba;et al.;T.Fujiwara et al.
• 通讯作者: T.Fujiwara et al.

水疱性膿痂疹とブドウ球菌熱症様皮膚症候群

大疱性脓疱疮和葡萄球菌热样皮肤综合征

• 发表时间: 2005
• 期刊: 最新医学 60
• 作者: 菅井 基行;小松澤 均;Osamu Yamasaki;菅井 基行;菅井 基行
• 通讯作者: 菅井 基行

微生物感染学-新しい感染の科学-

微生物感染学 - 感染的新科学 -

• 发表时间: 2005
• 作者: Mori I;Goshima F;Koshizuka T;Imai Y;Kohsaka S;Koide N;Sugiyama T;Yoshida T;Yokochi T;Kimura Y;Nishiyama Y.;森 勇
• 通讯作者: 森 勇