組織特異的Runx不活性化による発がんモデルマウスの作製と発がんの分子機構の解明

组织特异性Runx灭活建立小鼠致癌模型并阐明致癌分子机制

基本信息

批准号：
15023247
负责人：
谷内一郎
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15023247/
关键词：
発がん Runxファミリーモデルマウス

项目摘要

Runxファミリーの発がんにおける役割をマウス個体内で検討する目的に、Runx遺伝子の組織特異的不活性化マウスの作製を行っている。本年度は既に作製したRunx1コンヂィショナルノックアウトマウスを血液幹細胞でCreを発現するFes-Creマウスと交配した。その結果、末梢血球系細胞では一部の細胞でのみRunx1の不活性化が見られ、全ての幹細胞でRunx1の不活性化が起きていない事が考えられた。また、数カ月の観察では、著名ながん化は見られず、長期観察が必要と考えられた。次に、その変異が固形がん、特に胃がんの発生に関与すると考えられているRunx3遺伝子に関して、Runx3を組織特異的に不活性化する事の出来るRunx3コンヂィショナルノックアウトマウスを作製した。Runx3の場合、ES細胞に変異を導入した際に使用したneo遺伝子を除去したESクローンからは生殖系列を介し変異が伝わらなかったので、生殖系列でCreを発現するトランスジェニックマウスを用いneo遺伝子カセットマウス交配により除去する方法で、Runx3コンヂィショナルノックアウトマウスを作製した。次に、Runxファミリーの共通のβユニットであるCbfβをコードするCbfb遺伝子に関してもコンヂィショナルノックアウトマウスの作製を行った。現在、ES細胞のクローニングは終了し、ES細胞のインジェクションを行っている所である。また、Cbfβ遺伝子に関しては、2つのメジャーなアイソフォームを特異的に欠損するマウスも作製した。今後、これら遺伝子変異マウスを順次組織特異的なCreトランスジェニックマウスと交配することで組織特異的Runx不活性化マウスを作製し、その表現型解析を行うことでRunx不活性化の発がんにおける機能を解析する。

为了研究Runx家族在小鼠个体中癌症中的作用，我们一直在创建runx基因的组织特异性小鼠。今年，已经制备的Runx1连续敲除小鼠是用使用血干细胞表达CRE的FES-CRE小鼠育成的。结果，人们认为在外周血细胞系中的某些细胞中观察到Runx1失活，并且在所有干细胞中均未发生Runx1失活。此外，几个月的观察没有显示出明显的癌症发展，并且认为必须进行长期观察。接下来，生成了Runx3连续敲除小鼠，该小鼠允许Runx3在Runx3基因方面的组织特异性失活，该基因被认为与固体癌症（尤其是胃癌）的发展有关。在RUNX3的情况下，突变不会通过ES克隆通过种系传播，ES克隆在将突变引入ES细胞时已去除使用的NEO基因所使用的NEO基因，因此Runx3持续敲除小鼠是通过使用在种系中表达CRE的转基因小鼠通过交叉NEO基因基因Cassette小鼠去除其的。接下来，编码CBFβ的CBFB基因（Runx家族的常见β单位）也被作为连续敲除小鼠产生。当前，ES细胞一直在克隆，并且正在注入ES细胞。此外，还产生了针对CBFβ基因在两个主要同工型中特异性缺陷的小鼠。将来，这些突变小鼠将与组织特异性的CRE转基因小鼠依次交配，以产生组织特异性的Runx灭活小鼠，并将进行表型分析以分析Runx灭活的癌变的功能。