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増殖因子REGを分子標的とした新規抗がん剤リード化合物の探索

寻找针对生长因子 REG 的新型抗癌药物先导化合物

基本信息

批准号：
15025207
负责人：
高沢伸
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.REG(Regenerating Gene)遺伝子及びその関連遺伝子(REG遺伝子ファミリー)の転写調節領域を分離し、ルシフェラーゼ遺伝子の上流に挿入したレポータープラスミドの作製を行った。(1)この過程で、従来REG遺伝子ファミリーは4つの機能遺伝子(REG Iα,REG Iβ,HIP/PAR,REG IV)と1つの偽遺伝子(REG-related sequence)から構成されていると理解されてきたが、新しいREG関連機能遺伝子を見出した(論文投稿中)。(2)上述の新規遺伝子を含め全ての遺伝子の上流約1kbpをルシフェラーゼ遺伝子の上流に挿入したレポータープラスミドを構築した。2.大腸・直腸がんや胃がんなど種々のがん細胞でREG遺伝子ファミリーの遺伝子発現をRT-PCRで検討した。大腸・直腸がんではSW948,SW1417,COLO205,HCT15、胃がんではKATO III,MKN28,AGSなど多くの細胞でREG遺伝子ファミリーの発現が認められた。3.SW948細胞にREG遺伝子ファミリーのレポーター遺伝子を導入し、ルシフェラーゼアッセイを行ったところ、ルシフェラーゼ活性はRT-PCRで確認された遺伝子発現量に対応していたので、REG遺伝子ファミリーの発現は、転写レベルで調節されていることが明らかになった。4.REG遺伝子ファミリーのうち、ヒト大腸がん患者の生命予後と強い関連を示すのはREG Iαの発現である。そこで、REG Iαのレポーター遺伝子を導入したSW948細胞の培養培地に種々の化学物質を添加し、レポーターアッセイによりREG Iα遺伝子発現を抑制する化合物のスクリーニングを行った。この結果、数種類のREG Iα遺伝子発現低下を引き起こす化合物質を見出した。

1. REG (Regenerating Gene) gene and related gene (REG gene) gene are separated from each other in the regulatory domain, and the upstream of REG gene is introduced into the regulatory domain. (1)In this process, the REG sequence (REG Iα,REG Iβ,HIP/PAR,REG IV) and the REG-related sequence (REG-related sequence) are analyzed, and new REG related sequence (REG-related sequence) is presented (paper submission). (2)The new gene contains the upstream of the complete gene and the upstream of the gene is about 1kbp. 2. RT-PCR was used to detect gene expression in large intestine and rectum. Large intestine and rectum SW948,SW1417,COLO205,HCT15, stomach KATO III,MKN28,AGS 3. SW948 cells were transfected with REG gene, and the activity of REG gene was confirmed by RT-PCR. 4. REG gene expression is related to the occurrence of REG Iα. The introduction of REG Iα gene into SW948 cells and the addition of chemical substances to inhibit REG Iα gene production As a result, a number of REG I alpha molecules were found to be low in the presence of these compounds.