マトリプターゼの分解抑制に基づく消化器がん診断法の確立

基于抑制matriptase降解的胃肠癌诊断方法的建立

• 批准号: 15025238
• 负责人: 三善 英知
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025238/
• 关键词: がんの転移; マトリプターゼ; GnT-V; 糖鎖; β1-6GlcNAc; プロテアーゼ; 甲状腺がん; トリプシン

申請書の目的に従い、以下の実験を行った。β1-6GlcNAc鎖をもつマトリプターゼと持たないものを各々精製し、degradation assayにより検討すると、β1-6GlcNAc鎖をもつマトリプターゼの分解が遅延した。種々のプロテアーゼ処理の中でトリプシンを用いた分解実験が最も差を認めた。マトリプターゼに存在する4箇所のアスパラギン結合型糖鎖にsite-directed mutagenesis法により変異を入れ、COSおよびCOS-GnT-V細胞に発現させたところ、どの部分にも糖鎖が付加されていることが確認された。各々のマトリプターゼのトリプシンに対する抵抗性を検討したところ、772番目のAsnの糖鎖欠損マトリプターゼが最も容易に分解された。すなわち、772番目に付加されるβ1-6GlcNAc鎖がプロテアーゼに対する抵抗性に一番重要な働きをしていることがわかった(以上Glycobiology14,139-146)。甲状腺癌組織を用いて100症例以上で免疫組織染色を行ったところ、マトリプターゼとGnT-Vの染色には非常に良い相関関係を認めた。さらに甲状腺癌細胞KAK-1にGnT-Vを過剰発現させdegradation assayを行ったところ分解抑制効果を認めた。細胞レベルで認められた糖鎖によるマトリプターゼの機能制御が、実際のヒト癌組織において認められたこと、また分子レベルで772番目の糖鎖構造に結合するβ1-6GlcNAc鎖が最も重要な意味をもつことから、マトリプターゼを標的にした消化器がん診断の基礎データは充分に蓄積されたと言える。今後ELISA系を確立させ、実際のヒト消化器癌の血清を用いて臨床診断法としての価値を検討してゆきたい。

以下实验是根据申请表的目的进行的。纯化带有和没有β1-6GLCNAC链的成矩阵，当进行降解测定时，延迟具有β1-6GLCNAC链的基质酶的降解。在各种蛋白酶治疗中，在使用胰蛋白酶的降解实验中观察到了最大的差异。当突变使用位于定点的诱变中存在于基质酶中的四个天冬酰胺连接的聚糖中，并在COS和COS-GNT-V细胞中表达时，可以证实将聚糖添加到每个部分中。当研究每个基质酶对胰蛋白酶的耐药性时，最容易降解的是ASN 772的血糖缺陷型基质酶。换句话说，已经发现，添加到第772位的β1-6GLCNAC链在对蛋白酶的抗性中起着最重要的作用（Glycobiology 14,139-146）。使用甲状腺癌组织在100多个病例中进行了免疫组织学，并且在Matriptase和GNT-V的染色之间发现了非常好的相关性。此外，甲状腺癌细胞KAK-1用GNT-V过表达并进行降解测定，并发现它抑制了降解。由于在实际的人类癌组织中观察到了在细胞水平上观察到的基质酶的功能调节，而在分子水平上与第772个聚糖结构结合的β1-6GLCNAC链具有最重要的含义，因此可以说，可以说，对于胃肠癌诊断的基本数据已经足够累积了基本数据。将来，我们想建立一个ELISA系统，并使用人类消化癌的实际血清来检查其作为临床诊断方法的价值。

项目成果

Capurro M, Miyoshi E et al.: "Glypican-3 : A novel serum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma"Gastroenterology. 125. 89-97 (2003)

Capurro M、Miyoshi E 等人：“Glypican-3：肝细胞癌的新型血清和组织化学标记物”胃肠病学。

Nakahara S, Miyoshi E et al.: "Involvement of oligosaccharide charges in α_5β_1 integrin in a cisplatin-resistant human squamous cell carcinoma cell line"Molecular Cancer Therapeutics. 2. 1207-1214 (2003)

Nakahara S，Miyoshi E 等人：“顺铂抗性人鳞状细胞癌细胞系中α_5β_1整联蛋白中寡糖电荷的参与”《分子癌症治疗》2. 1207-1214 (2003)。

Noda K, Miyoshi E et al.: "Relationship between elevated FX expression and increased production of GDP-L-fucose, a common donor substrate for fucosylation in human hepatocellular carcinoma and hepatoma cell lines"Cancer Research. 63. 6282-6289 (2003)

Noda K、Miyoshi E 等人：“FX 表达升高与 GDP-L-岩藻糖产量增加之间的关系，GDP-L-岩藻糖是人肝细胞癌和肝癌细胞系岩藻糖基化的常见供体底物”癌症研究。

Ihara S, Miyoshi E et al.: "Addition of β1-6 GlcNAc branching on matriptase increases the stability to degradation, especially via the Asn 772 site"Glycobiology. 14. 139-146 (2004)

Ihara S、Miyoshi E 等人：“在基质酶上添加 β1-6 GlcNAc 分支可提高降解稳定性，尤其是通过 Asn 772 位点”Glycobiology. 14. 139-146 (2004)

Ito Y, Miyoshi E et al.: "Expression of α1,6 fucosyltransferase is bimodal in papillary carcinoma progression"Cancer Letter. 200. 167-172 (2003)

Ito Y、Miyoshi E 等人：“α1,6 岩藻糖基转移酶的表达在乳头状癌进展中是双峰的”Cancer Letter。200. 167-172 (2003)