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In vitro受精法を用いた胚発生第一分裂における極性決定の分子機構

体外受精胚胎发育第一次分裂极性决定的分子机制

基本信息

批准号：
15031222
负责人：
小柴共一
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

トウモロコシの卵細胞、in vitro受精法で作製した2細胞胚、その胚から単離した頂端細胞および基部細胞からcDNAを合成し、これら4種のcDNAをテンプレートとしてRAPD-PCRを行った。その結果、受精後に新たに発現する遺伝子もしくは発現が抑制される遺伝子が同定され、それらの発現パターンから1)頂端細胞においてのみ発現する遺伝子、2)基部細胞においてのみ発現する遺伝子、3)頂端および基部細胞の双方の細胞で発現する遺伝子、4)頂端細胞においてのみ発現が抑制されている遺伝子、5)基部細胞においてのみ発現が抑制されている遺伝子、6)恒常的に発現している遺伝子、の6つのグループに分類した。さらに、受精により発現が誘導される遺伝子の発現を受精卵から2細胞胚までの受精卵発達過程で調べたところ、胚発生の第一細胞分裂以前に受精卵細胞中においてそれら遺伝子が既に発現していることが明らかになった。このことから、グループ1または2の遺伝子転写産物が受精卵中の頂端または基部領域に局在していることを示唆された。トウモロコシ卵細胞タンパク質をSDS-または2D-PAGEで展開後、ゲル中の主要タンパク質バンド/スポットをLC-MS/MSにより解析した。その結果、卵細胞主要タンパク質として、3種の解糖系酵素、2種のミトコンドリアタンパク質およびアネキシンp35を同定した。未開花のイネ花より卵細胞と精細胞をおのおの単離する系を確立し、イネin vitro受精系の確立に向けて研究を進めている。また、16個のイネ卵細胞からのcDNA合成に成功した。受精卵や2細胞胚など極微量試料からのRNAを出発材料にしてマイクロアレイ解析を行う予定であるが、このような微量のRNAをアレイ解析用のプローブ作製に用いた際のデータの信頼性を検証する研究も進行させている。

In vitro fertilization, 2-cell embryos, 3-cell embryos, 4-cell cDNA were synthesized, and RAPD-PCR was performed. 1) Gene expression in apical cells, 2) Gene expression in basal cells, 3) Gene expression in both apical and basal cells, 4) Gene expression in apical cells, 5) Gene expression in both apical and basal cells, 6) Gene expression in both apical and basal cells, 7) Gene expression in apical cells, 8) Gene expression in both apical and basal cells, 9) Gene expression in apical cells, 9) Gene expression in both apical and basal cells, 9) Gene expression in apical cells, 9) Gene expression in both apical and basal cells, 9) Gene expression in apical cells, 5) inhibition of basal cell growth; 6) constant growth; 6) classification of basal cell growth. In the process of development of the fertilized egg from the 2-cell embryo to the fertilized egg before the first cell division of the embryo, the embryo is developed and the embryo is induced. This is the first time that a single egg has been fertilized, and the second time that a single egg has been fertilized. After SDS-PAGE, the main components of the protein were analyzed by LC-MS/MS. The results showed that the egg cells were mainly composed of three kinds of glucose-degrading enzymes, two kinds of glucose-degrading enzymes and three kinds of glucose-degrading enzymes. The establishment of a line for the reproduction of eggs and sperm cells before flowering and the establishment of a vitro-fertilized line are being studied. The cDNA synthesis of 16 eggs was successful. The analysis of RNA from embryos and embryos of 2 cells was carried out to determine whether there was any trace of RNA.