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分子シャペロン基質認識の分子構造基盤及びメカニズムの解明

阐明分子伴侣底物识别的分子结构基础和机制

基本信息

批准号：
15032207
负责人：
南康文
金额：
$ 5.38万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032207/
关键词：
Hsp90 Cdc37 分子シャペロンプロテアソーム活性化因子 PA28

项目摘要

(1)Hsp90βの遺伝子を二つノックアウトしたDT40細胞(βnull)のα遺伝子を一つ破壊したところ(以下、α+/-βnull)生育温度である39℃における生育速度が、野生株やβnull株に比べて顕著に低下していた。(2)α+/-βnull株は43℃における生育に関しても、野生株やβnull株に比べて顕著に低下していた。しかし、熱ショック応答について、熱ショック因子であるHsf3の活性化に伴うリン酸化を調べたところ、α+/-βnull株は野生株と同等のリン酸化及びattenuationによる脱リン酸化が認められ、Hsp70の誘導発現についても遜色なかった。(3)α遺伝子を一つノックアウトした細胞(α+/-β+/+)を作製し、解析したところ、39℃及び43℃における生育がα+/-βnull株と同程度にまで低下していた。(4)Cdc37を、Raf-1のキナーゼ領域と共にCos7細胞に発現させ、結合領域を探る実験を行った結果、Cdc37のN領域であるとこれまで報告されていたのとは異なり、Cdc37のM領域に結合することが判明した。(5)Cdc37はダイマーでHsp90に結合することが報告されていたが、キナーゼ領域が存在しないと、一分子のCdc37しかHsp90(ダイマー)には結合せず、キナーゼ領域(即ち、基質)が存在する場合に限り、Cdc37二分子がキナーゼとHsp90と共に複合体を形成することが分かり、キナーゼ分子の成熟過程におけるHsp90とCdc37の役割を探る上で重要な知見が得られた。

(1) Hsp90 β-gene is the first gene in DT40 cells (βnull) and α-gene is the second gene in DT40 cells (α+/-βnull). The growth temperature is 39℃ and the growth rate is lower than that of wild plants and βnull plants. (2)α+/-βnull strain is lower than βnull strain at 43℃. The activation of Hsf3 is accompanied by acidification, and the α+/-βnull strain is accompanied by acidification and attenuation. The induction of Hsp70 is accompanied by acidification. (3)α+/-β+/+ cells are controlled, analyzed and produced at 39℃ and 43℃. α+/-βnull plants are also reduced. (4)Cdc-37, Raf-1 and Cdc-37 were identified in Cos-7 cells and in M domains. (5) Cdc37 is bound to Hsp90, and Hsp90 is bound to Cdc37, and Hsp90 is bound to Cdc37. Hsp90 and Cdc37 are important insights into molecular maturation.