小胞体における分子シャペロンの役割

分子伴侣在内质网中的作用

基本信息

  • 批准号:
    09276228
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.66万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1997 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

イヌ膵臓から単離、精製した小胞体の粗抽出液中に、ヒト由来の細胞質性DnajホモログであるHsp40に対する抗体と反応する、分子量約40Kのバンドを見出し、そのN末端アミノ酸分析からバクテリアのDNAJホモログと相同性の高い配列があることが判明した。更に、電気泳動後にバンドを切り出して、リジルエンドペプチダーゼ消化し、その分解産物を逆相カラムクロマトグラフィーにより分画し、いくつかの内部アミノ酸配列を決定した。そのうちの一つは、酵母小胞体の可溶性DnajホモログであるScj1pと部分的に似ていた。そこで、N末端配列とこの内部配列を元にオリゴヌクレオチドを作製し、市販のイヌ肝臓のcDNAライブラリーををテンプレートにPCRを行った。しかし、顕著なDNA断片の増幅は認められなかった。次に、N末端配列を元に作製したオリゴヌクレオチドをプローブとしてスクリーニングを行うことにした。市販のイヌのcDNAライブラリーはマウスやラットに比べて需要が少なく、問題があるかも知れないので、まず、新鮮なイヌ肝臓を用いてmRNAを抽出して、1Kb以下を除去してからcDNAライブラリーを作製した。約40万個をスクリーニングし、3個のポジティブなクローンを得た。最終的には、2種類のクローンがあった。一つについては、シークエンスの結果、プローブと一致する配列が見つかったが、目的とするものではなかった。もう一つについては、シークエンスの途中であり、今のところ、プローブの配列は見つかっていない。
The cytoplasmic Dnaj of the isolated and purified microsomes was identified by Dnaj sequencing and high homology analysis of the N-terminal Dnaj of the purified microsomes. In addition, after electro-migration, the internal acid sequence is determined by cutting out, separating, digesting and decomposing products in reverse phase. The soluble Dnaj of yeast microsomes is similar to that of Scj1p N-terminal alignment and internal alignment are controlled by PCR. The DNA fragments were amplified and identified. Secondly, the N terminal configuration is controlled by the single control and the switch is operated. The market price of cDNA is lower than that of the market price. The problem is that the mRNA of cDNA is extracted from the market price. The mRNA of cDNA is extracted from the market price. The mRNA of cDNA is removed from the market price. About 400,000 calls, 3 calls. Finally, two kinds of The result of the test is consistent with the result of the test.もう一つについては、シークエンスの途中であり、今のところ、プローブの配列は见つかっていない。

项目成果

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    $ 1.66万
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