タンパク質品質管理機構におけるPA28の生理的機能の解明

阐明PA28在蛋白质质量控​​制机制中的生理功能

• 批准号: 14037258
• 负责人: 南 康文
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14037258/
• 关键词: プロテアソーム活性化因子; PA28; タンパク質品質管理機構; 分子シャペロン; Hsp90

プロテアソーム活性化因子PA28の生理的機能を明らかにする目的で、線虫を用いた実験を行った。まず、PA28の発現部位を特定するため、GFPを融合したPA28遺伝子発現ベクターを構築した。公表されているPA28遺伝子のDNA配列に従ってPCRを行い、遺伝子DNAを調製し、最も3'側のエキソンの中にGFP遺伝子を挿入した。PA28遺伝子の5'上流は極端に短く、5'側の遺伝子までの間隔が数百ベースしかないことから、ポリシストロニックであると予想された。そこで、発現調節領域があると考えられる5'上流の遺伝子二つを含む領域まで伸ばしたもの(全長11kB)を調製し、線虫にマイクロインジェクトしたが、蛍光の検出はできなかった。PCRの正確さ或いはDNAの安定性などの問題があると考えられるが、抗体による検出に方針を変え、その準備を進めている。次に、PA28のRNAiがdaf-11/21の化学走性に対して影響があるかもしれないと予想し、AWC神経については揮発性誘引物質であるイソアミルアルコールを、また、ASE神経については水溶性誘引物質であるNaClを、それぞれ用いて常法によりアッセイした。その結果、いずれの神経のおいても、また、daf-11/21のいずれの変異においても、PA28のRNAiによる変化は認められなかった。このことから、daf-11/21のDaf-cに対するPA28のRNAiの影響は神経におけるものではない可能性が高まり、当初、予想した二つのシナリオのもう一つ、即ち、神経よりも下流の細胞において働いていると考えられ、その場合、最も高い可能性としてDAF-12との相互作用が予想される。そこで、その検証のために必要となるdauerを誘導する因子であるフェロモンの調製に取り掛かり、その準備を進めているところである。

プ ロ テ ア ソ ー ム activation factor PA28 の physiological function を Ming ら か に す る purpose で, nematode を い た be 験 を line っ た. ま ず, PA28 の 発 is site specific す を る た め, GFP fusion を し た PA28 posthumous son 伝 発 now ベ ク タ ー を build し た. Traces of male table さ れ て い る PA28 伝 の with DNA sequence に 従 っ て PCR を い, heritage 伝 DNA を し modulation, the most も 3 'side の エ キ ソ ン の に in GFP heritage 伝 son を scions into し た. PA28 posthumous son 伝 の 5 'upstream は extreme に short く, 5' side の heritage 伝 son ま で の interval が hundreds of ベ ー ス し か な い こ と か ら, ポ リ シ ス ト ロ ニ ッ ク で あ る と to think さ れ た. そ こ で, 発 now adjust が あ る と exam え ら れ る 5 'upstream の heritage 伝 son two つ を containing む field ま で stretch ば し た も の を し modulation (total length of 11 KB), nematodes に マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク ト し た が 蛍 light の 検 out は で き な か っ た. PCR の さ right or い は DNA の stability な ど の problem が あ る と exam え ら れ る が, antibody に よ る 検 out に policy を - え, そ の prepare を into め て い る. に, PA28 の RNAi が daf - 11/21 の chemical go sexual に し seaborne て influence が あ る か も し れ な い と think し, AWC god 経 に つ い て は swing 発 sexually attractive substance で あ る イ ソ ア ミ ル ア ル コ ー ル を, ま た, ASE god 経 に つ い て は water-soluble attractive substance で あ る NaCl を, そ れ ぞ れ with い て method often に よ り Youdaoplaceholder0 アッセ た た. そ の results, い ず れ の god 経 の お い て も, ま た, daf - 11/21 の い ず れ の - different に お い て も, PA28 の RNAi に よ る variations change は recognize め ら れ な か っ た. こ の こ と か ら, daf - 11/21 の daf -c に す seaborne る PA28 の RNAi の influence は god 経 に お け る も の で は な likely が い ま り, at the beginning, I want to し た two つ の シ ナ リ オ の も う つ, namely ち, god 経 よ り も obscene の cells に お い て 働 い て い る と exam え ら れ, そ の occasions, the most high も と い possibilities Youdaoplaceholder0 DAF-12と される interaction が think される. そ こ で, そ の 検 card の た め に necessary と な る dauer を induced す る factor で あ る フ ェ ロ モ ン の modulation に り placed か り, そ の prepare を into め て い る と こ ろ で あ る.