蛍光タンパク質プローブを用いた高尿酸血症治療薬スクリーニング法の開発

利用荧光蛋白探针筛选高尿酸血症治疗药物的方法的开发

• 批准号: 15K18847
• 负责人: 中村 真希子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K18847/
• 关键词: 尿酸トランスポーター; 蛍光タンパク質; 尿酸トランスポーター阻害薬

Uricase-HyPer融合タンパク質によるGLUT9輸送評価系の構築1．GLUT9/Uricase-HyPer共発現細胞株の構築尿酸トランスポーターGLUT9の哺乳類細胞発現用ベクターはチェコ共和国カレル大学のStiburkova博士より供与を受けた。GLUT9とUricase-HyPerをコードするプラスミドを、アフリカミドリサル腎由来COS-7細胞、あるいはチャイニーズハムスター卵巣由来CHO細胞にエレクトロポレーション法により遺伝子導入し2日間培養した。GLUT9の発現は逆転写PCR法にて確認し、Uricase-HyPerの発現は蛍光顕微鏡により確認した。結果、チャイニーズハムスター卵巣由来CHO細胞にてGLUT9とUricase-HyPerを共発現する細胞を取得可能である条件を確立することができた。2．Uricase-HyPer融合タンパク質による尿酸輸送評価上記で構築した細胞に尿酸を添加し、蛍光プレートリーダーにて30分間の蛍光変化を追跡した。ネガティブコントロールとして、アデニンを添加した細胞も検討した。結果、尿酸添加濃度依存的に蛍光強度比が変化することを確認した。アデニンを添加した細胞、およびHyPerのみを遺伝子導入した細胞ではそのような蛍光変化が見られなかったことから、構築したUricase-HyPer融合タンパク質により、蛍光を指標とした尿酸特異的検出が可能であることを示すことができた。

Construction of GLUT9 Delivery Evaluation System for Uricase-HyPer Fusion 1. Construction of GLUT9/Uricase-HyPer Co-development Cell Line for Mammalian Cell Development of GLUT9 GLUT9 and Uricase-HyPer are introduced into COS-7 cells, CHO cells, and CHO cells during the day. GLUT9 was identified by reverse transcription PCR, and Uricase-Hyper by optical microscopy. Results: CHO cells were identified by GLUT9 and Uricase-Hyper. 2.Uricase-Hyper fusion is a 30-minute process for tracking uric acid transport in cells. The number of people who have died in the past few years has increased. The results showed that the ratio of light intensity to uric acid concentration was different. Add a cell, a hypersite, and introduce a cell into which you can view and construct a Uricase-Hypersite fusion.

项目成果

<b>The first case of familial Lesch-Nyhan variant in Japan revealed by molecular genetic examination</b>

<b>分子遗传学检测发现日本首例家族性Lesch-Nyhan变异</b>

• DOI: 10.6032/gnam.39.121
• 发表时间: 2015
• 期刊: GOUT AND NUCLEIC ACID METABOLISM
• 作者: Yasufumi Matsuda;Yasukazu Yamada;Nobuaki Wakamatsu;Miwa Misawa;Katsuya Egawa;Takahiro Yamauchi;Makiko Nakamura;Hiroshi Hasegawa;Kimiyoshi Ichida;Takanori Ueda
• 通讯作者: Takanori Ueda

尿酸トランスポーターABCG2による高尿酸血症治療薬輸送の検討

尿酸转运蛋白ABCG2转运高尿酸血症治疗药物的研究

• 发表时间: 2016
• 作者: 中村 真希子;豊田 優;髙田 龍平;長谷川 弘;市田 公美
• 通讯作者: 市田 公美

脳内ZMP増加によるAMPK活性化と神経症状発現の関連性に関する検討

脑内ZMP增加引起的AMPK激活与神经症状发生关系的研究

• 发表时间: 2015
• 作者: 大木 楓奈;伊藤 祥子;中島 健裕;篠原 佳彦;中村 真希子;市田 公美
• 通讯作者: 市田 公美

痛風・核酸代謝における検査・診断法の進歩 尿酸トランスポーター機能評価法

痛风与核酸代谢检测诊断方法进展尿酸转运蛋白功能评价方法

• 发表时间: 2015
• 期刊: 高尿酸血症と痛風
• 作者: 中村 真希子;市田 公美
• 通讯作者: 市田 公美

尿酸トランスポーターABCG2による高尿酸血症治療薬アロプリノール輸送の検討

高尿酸血症治疗药物别嘌呤醇通过尿酸转运蛋白 ABCG2 的转运研究

• 发表时间: 2015
• 作者: 大塚 ひかる;中村 真希子;佐藤 慧;豊田 優;髙田 龍平;長谷川 弘;市田 公美
• 通讯作者: 市田 公美