HTLV-Iのneurotropismに関する研究(特にATLとHAMの病態組織をもちいたin situ liybridization によるvirusの検索)

HTLV-I的向神经性研究（特别是利用ATL和HAM的病理组织进行原位杂交进行病毒搜索）

• 批准号: 03151052
• 负责人: 納 光弘
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03151052/
• 关键词: HAM; In situ hybridization; immunohistochemistry; Neurotropism; Polymelase chain reaction; HTLVーI; in situ hybridization; neurotropism

HAMの病変形成におけるHTLVーIの関わりについて検討し、これまでに、(1)剖検例中枢神経のHTLVーI proviral DNAをPCR法により検索し、HAM脊髄組織に存在を確認、延髄より上位の中枢神経では陰性で、脊髄とは明瞭に区別されること。(2)in situ hybridizationにより脊髄病巣に浸潤しているCD4陽性細胞の一部にHTLVーI proviral DNAが存在することを報告した。病巣でのHTLVーIの局在を明らかにするための、本年度はまず、HAM凍結標本よりDNAを抽出し、定量的PCR法によりproviral DNAのコピー数を検討した。その結果、脊髄病巣では細胞1000個あたり4コピー程度存在し、小脳では0.2コピー以下であった。現在、浸潤炎症細胞の数、特にTーcell subset、macrophage、glia細胞の数と比較しどの系統の細胞に存在しているかについて推定を試みている。また、蛍光色素標識によるin situ hybridization(FISH)法が確立し、さらに染色体標本においてスライド標本自体をPCR増幅する方法が開発できたので、HAM脊髄の凍結標本を用いて同方法を応用した。HTLVーIのPxをコードする領域をSK44・SK45プライマーを用いて凍結切片スライド上でPCR増幅し、あらかじめPCR増幅していたPxプローブをビオチンあるいはジゴキシゲニンで標識し、hybridization後、蛍光染色にてシグナルを観察した。その結果、血管周囲炎症細胞浸潤巣で、少数ではあるが明瞭に陽性の細胞が認められた。細胞マーカーによる二重染色や、コントロールを含む多数例での検討を進め、病巣における感染細胞の種類と動態を明らかにしたい。ATL剖検例の検索も進んでおり、中枢神経への著しい浸潤例と、全身臓器への浸潤にも関わらず神経組織へは殆ど入っていない例があり、HTLVーI感染ATL細胞には向神経性クローンとそうでないものとが存在することが示唆された。向神経性を規定している因子の解析特に感染T細胞、ATL細胞と神経組織間の接着因子について今後研究を進めたい。

HAM disease formation in HTLV I related to the detection, detection,(1) analysis of HTLV I proviral DNA in central nervous system PCR method to detect, HAM spinal tissue existence to confirm, delay, upper central nervous system negative, spinal cord clear distinction. (2)in Some of the CD4 positive cells in the spinal cord were infected by situ hybridization and some of the HTLV I proviral DNA was detected. This year's HAM frozen DNA extraction and quantitative PCR method are discussed. The result of chiropractic disease is 1000 cells. The degree of chiropractic exists. The degree of chiropractic is 0.2. Now, the number of infiltrating inflammatory cells, specific T cell subset, macrophage, glia cells, and the number of cells present in the system are estimated. The method of in situ hybridization(FISH) for the identification of chromosomal DNA was developed and used in the same way as HAM and frozen DNA. HTLV I Px is the domain name SK44·SK45. The domain name SK44·SK45 is the domain name SK44·SK45. The domain name SK 44·SK 45 is the domain name SK 44·SK 45. The domain name SK 44·SK 45 is the domain name SK 44. Results: Perivascular inflammatory cell infiltration, a small number of positive cells were identified. The number of infected cells and the number of infected cells were determined. ATL cells are infected with HTLV, and ATL cells are infected with HTLV. The analysis of neuroregulatory factors, especially T cells, ATL cells and neurotissue adhesion factors, will be further studied in the future.

项目成果

Izumo S.,Ijichi T.,Higuchi I.et al.: "Neuropathology of HTLV-I-Associated Myelopathy.--A report of two cases--" Acta Paediatr.Jpn.34. 358-364 (1992)

Izumo S.、Ijichi T.、Higuchi I.等人：“HTLV-I 相关脊髓病的神经病理学。--两个病例的报告--” Acta Paediatr.Jpn.34。

Mitsuhiro Osame,et al: "Nationwide survey of HTLV-I-associated myelopathy in Japan:Asscociation with blood transfusion." Ann Neurol. 28. 50-56 (1991)

Mitsuhiro Osame 等人：“日本 HTLV-I 相关脊髓病的全国调查：与输血的关联。”

Itsuro Higuchi,et al: "Failure to detect HTLV-I by in witu hybridization in the biopsied muscles of viral carriers with polymyositis." Muscle & Nerve. 14. 43-47 (1992)

Ituro Higuchi 等人：“未能通过原位杂交在患有多发性肌炎的病毒携带者的活检肌肉中检测到 HTLV-I。”

末原 雅人 他: "HAM患者髄液における抗HTLVーI抗体の意義ーrecombinant GagーEnvhybrid proteinを用いたELISA法とparticle agguluination法の比較検討" 臨床病理. 40. (1992)

Masato Suehara等人：“HAM患者脑脊液中抗HTLV-I抗体的意义-使用重组Gag-Envhybrid蛋白和颗粒凝集法的ELISA方法的比较研究”临床病理学40。(1992)。

Ohhara Y.,Iwasaki Y.,Izumo S.et al: "Search for human T-cell leukemia virus sype I(HTLV-I)proviral sequences by polymerase chain reaction in the central nervous system tissue of HTLV-I associated myelopath" Arch.Virol.124. 31-43 (1992)

Ohhara Y.、Iwasaki Y.、Izumo S.等人：“通过聚合酶链反应在 HTLV-I 相关骨髓病的中枢神经系统组织中搜索人 T 细胞白血病病毒型 I (HTLV-I) 前病毒序列”Arch