Development of RNA-targeting drugs for hematopoietic neoplasms

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本研究では、脂質ナノ粒子(Lipid Nanoparticle: LNP)などの新しいドラックデリバリーシステムを活用して、造血器腫瘍発症の原因となるRNAを直接標的とする治療法の開発を目指している。今年度は、白血病原因融合遺伝子RUNX1-RUNX1T1およびMLL-AF9をsiRNAやCRISPR-Cas13を用いて標的とする治療法の開発を試みたが、十分な治療効果を認めなかった。標的融合遺伝子のノックダウン効果が不十分であったことが原因と考えられ、現在siRNAやcrRNAのデザインにさらなる工夫を加えると同時に、複数のsiRNA/crRNAを同時に活用する方法など、新たな手法を開発中である。一方、造血器腫瘍を含む様々ながん細胞で高発現しているlong noncoding RNA (lncRNA)を標的とする治療法の開発も行い、パラスペックル構成lncRNAであるNEAT1を標的とするCRISPR-Cas13が、骨髄系腫瘍細胞の増殖を強く抑制することを見出した。またRNA-seq、RNA pull-downアッセイ、およびパスウェイ解析を行い、NEAT1を標的とするCRISPR-Cas13が核小体ストレスの誘導などを介して骨髄系腫瘍の増殖を抑制していることを明らかにした。さらに、crRNAのループ配列の最適化や複数のNEAT標的配列をつなぐというcrRNAの改良を行い、改良型crRNAがより強い細胞増殖抑制効果を示すことを確認した。そして、これまでに開発してきた複数の造血器腫瘍指向形LNPの導入効率を、様々な造血器腫瘍細胞株を用いて検討し、特に導入効率の良いLNPを同定した。今後は、このLNPにsiRNAやCas13/crRNAを内包したものを作製し、造血器腫瘍に対する治療効果を検証する。