造血系転写因子RUNX1のユビキチン化修飾および分解制御機構の解明

造血转录因子RUNX1泛素化修饰及降解控制机制的阐明

• 批准号: 15H06162
• 负责人: 合山 進
• 金额: $ 1万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06162/
• 关键词: RUNX1; ユビキチン化修飾; 造血器腫瘍

造血系転写因子RUNX1の発現、活性は精緻に制御されており、その破綻は造血器腫瘍発症の原因となる。RUNX1の機能はユビキチン-プロテアソーム系を介した調節を受けることが知られているが、その詳細なメカニズムはほとんどわかっていない。今回我々は、高感度かつハイスループットにユビキチン化を検出可能なユビキチン化アッセイ法を用いて 約300種類のユビキチン化酵素プロテインアレイとRUNX1を対象にスクリーニングを行い、 RUNX1のユビキチン化修飾を誘導する候補分子を同定した。この中には、STUB1など既知のRUNX1ユビキチン化誘導酵素が含まれており、スクリーニングは正しく働いていると考えられた。さらに我々は、個々の候補ユビキチン化酵素とRUNX1の関係を詳細に検討し、RUNX1ユビキチン化を誘導する分子を複数同定した。また、RUNX1タンパクの安定性をGFPとmCherryの蛍光強度の比で評価することのできるレポーター細胞を用いて、個々のユビキチン化酵素をノックダウンした時のGFP/mCherry蛍光強度の変化を検証した。この実験では、意外にも個々のユビキチン化酵素ノックダウンによるRUNX1タンパクの大幅な発現増加は認めなかった。この結果は、RUNX1のユビキチン化修飾及び安定性は複数の酵素により複合的に制御されており単一分子のノックダウンでは大きく変化しないことを示唆している。もしくは、我々が同定したRUNX1ユビキチン化誘導分子の中に、RUNX1の分解を促進するのではなく機能調節を行うものが含まれている可能性もある。今後は、個々の分子により誘導されるRUNX1ユビキチン化修飾の役割を明らかにするとともに、ゲノム編集技術を用いてRUNX1ユビキチン化酵素の欠失を誘導し、その生理的意義を解明する。

The hematopoietic system rewrite factor RUNX1 is the cause of hematopoietic organ swelling and infection, and the activity is fine and the control is fine. RUNX1's function is adjustable and adjustableことが知られているが、そのDetailsなメカニズムはほとんどわかっていない. This time I will use the high-sensitivity かつハイスループットにユビキチン化を検possibleなユビキチン化アッセイ法を用いてApproximately 300 types of chemical enzymes, including RUNX1 is a chemically modified and induced candidate molecule with the same structure.この中には、STUB1など RUNX1 ユビキチンinducing enzymeがまれており、スクリーニングは正しく働いていると卡えられた. The relationship between さらに我々は, individual 々の candidate ユビキチンzyme and RUNX1 is detailed, and RUNX1 ユビキチンをinduced するmolecules を plural same definition した.また, RUNX1 タンパクの stable をGFP とmCherry の蛍の比でreview価することのできるレポーター thin The cells were transformed using the enzyme をノックダウンしたのGFP/mCherry to change the light intensity.この実験では、accidental にも一々のユビキチン化zymeノックダウンによるRUNX1タンパクの大な発 Increase the recognition of めなかった.このRESULTS, RUNX1 のユビキチンchemical modification and びstability はplural enzyme により compound にControl the されており単一molecule of the のノックダウンでは大きく変化しないことをshows the している.もしくは、我々が同定したRUNX1ユビキチン化inducing moleculeの中に、RUNX1のDecomposition を promotion す る の で は な く function adjustment を 行 う も の が ま れ て い る possibility も あ る. From now on, individual molecular により induced RUNX1 ユビキチンchemical modification のservice cut を明らかにするとともに, The compilation technology of ゲノム is used to いてRUNX1 and ユビキチンchemical enzyme is induced and the physiological significance of その is clarified.