Enzymatische Synthese und biochemische Charakterisierung von nucleotidaktivierten Di- und Oligosacchariden

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Im vorliegenden Fortsetzungsantrag sollen enzymatisch synthetisierte Nucleotiddi- und oligosaccharide mit rekombinanten Glycosyltransferasen biochemisch charakterisiert werden. Durch das laufenden DFG-Projekt El 135/4-1 werden die mit unterschiedlichen Glycosidasen optimierten Synthesen von 14 definierten Nucleotidsacchariden für die geplanten Untersuchungen ausgearbeitet sein. Eigene Vorarbeiten haben bereits gezeigt, dass das Nucleotiddisaccharid Gal(ß1-4)GlcNAc(a1-UDP (UDP-LacNAc) in vitro als kompetitiver Inhibitor der core2 ß6-GlcNAc-Transferase wirkt. Das Vorkommen von UDP-LacNAc in der Humanmilch gibt Anlaß zu der Hypothese, dass Nucleotidsaccharide in vivo als Regulatoren von Glycosyltransferasen wirken könnten. Im Mittelpunkt des Fortsetzungsantrags steht daher die biochemische Charakterisierung von definierten Nucleotidsacchariden als Inhibitoren ausgesuchter rekombinanter Glycosyltransferasen. Die benötigten Nucleotiddisaccharide werden im 10-50 mg Maßstab mit Hilfe der etablierten Vorschriften präparativ synthetisiert. Schließlich sollen die erzielten Ergebnisse eine Bewertung der biochemischen Funktion von Nucleotidsacchariden als Inhibitoren von eukaryontischen Glycosyltransferasen ermöglichen.