Selective labeling of glycoconjugates with modified nucleotide sugars as donor substrates of recombinant glycosyltransferases

VasZiel des vorliegenden Antrags is die selektive Markierung von Glykokonjugaten（Oligosaccharide，Glykoproteine，Glykolipide）mittels nukleotidaktivierter Galactose- bzw.- N-乙酰半乳糖胺衍生物，是β 3/4半乳糖基转移酶（GalTs）重组糖基转移酶的供体底物。多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAc-Ts）家族特异性Akzeptorstrukturen übertragen韦尔登können。在中间点的Vorhabens stehen一个direkte和indirekte Markierungsstrategie，unterschedliche Ansprüche和Akzeptanz的Gal-Ts和ppGalNAc-Ts的合成Nukleotidzuckerderivatives stellen。在直接营销之后，转移将使一个功能化的扎克伯格成为一个化学选择性的市场。本文采用化学酶法合成UDP-α-D-半乳糖和UDP-N-乙酰基-α-D-半乳糖胺，用半乳糖氧化酶与生物素（生物素，均质和异质双功能试剂）的化学反应原位酶促氧化Zuckers的C-6羟基基团。以HPLC分析、蛋白质印迹和微滴定板的形式检测标记的糖缀合物溶液，并进行韦尔登。

Das Ziel des vorliegenden Antrags ist die selektive Markierung von Glykokonjugaten (Oligosaccharide, Glykoproteine, Glykolipide) mittels nukleotidaktivierter Galactose- bzw.- N-Acetylgalactosaminderivate, die als Donorsubstrate von rekombinanten Glykosyltransferasen aus den beta3/4Galactosyltransferasen (GalTs) bzw. Polypeptid N-Acetylgalactosaminyltransferase (ppGalNAc-Ts) Familien auf spezifische Akzeptorstrukturen übertragen werden können. Im Mittelpunkt des Vorhabens stehen eine direkte und indirekte Markierungsstrategie, die unterschiedliche Ansprüche an die Akzeptanz der Gal-Ts und ppGalNAc-Ts für die synthetisierten Nukleotidzuckerderivate stellen. Bei der indirekten Markierung wird nach dem Transfer eines funktionalisierten Zuckers ein Markierungsreagenz chemoselektiv gekoppelt. Beide Strategien beinhalten chemoenzymatische Synthesen von modifizierter(m) UDP-alpha-D-Galactose und UDP-N-Acetyl-alpha-D-galactosamin, in denen die enzymatische Oxidation der C-6 Hydroxylgruppe des Zuckers durch Galactose Oxidase mit der chemischen Kopplung von Hydrazidreagenzien (Biotin, Fluoreszenzfarbstoffe, homo- und heterobifunktionelle Reagenzien) in situ verknüpft wird. Die markierten Glykokonjugate sollen in Form von HPLCAnalysen, Western Blots und Mikrotiterplattentests untersucht und charakterisiert werden.