Aufklärung von molekularen Mechanismen der Thrombozytenregulation durch 2-D-Gelelektrophorese und ESI-MS / MALDI-TOF-MS

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Die intrazellulären Signalwege der durch NO/cGMP aktivierten cGMP-abhängigen Proteinkinase (cGK) in humanen Plättchen, die zu einer Inhibierung der Thrombozytenaggregation führen, sind nur zum Teil bekannt. Das Ziel unserer geplanten Arbeiten ist die Identifizierung neuer in vivo Substrate der cGK, die die Mechanismen der Thrombozytenhemmung zu verstehen helfen - speziell die Inaktivierung des Proteinkinase C Signalweges. Geplant ist die radioaktive Markierung der Thrombozyten in vivo mit anschließender zweidimensionaler Auftrennung des Proteingemisches und nachfolgender Identifizierung einzelner radioaktiv markierter Proteine durch nano-Elektrospray-Massenspektrometrie und Mikrosequenzierung. Dabei werden die erhaltenen Daten mit Protein- und Nukleotidsequenzdatenbanken abgeglichen oder können zur Synthese von Oligonukleotidprimern für eine anschließende Klonierung benutzt werden.