Untersuchung des molekularen Mechanismus der schnellen O2-abhängigen Regulation der DNA-Replikation in Säugerzellen am Modell der SV40-Replikation in vivo

点击翻译按钮获取中文摘要

Proliferierende Säugetierzellen können auf ungünstige Versorgungs- und Stoffwechselbedingungen, insbesondere Hypoxie, mit einer schnellen und leicht reversiblen Herunterregulation der DNA-Replikation antworten. Dadurch können Stoffwechselkatastrophen und Apoptose-Induktion vermieden werden. U.a. werden dabei Replikon-Initiation in einem definierten Zustand arretiert, auch beobachtbar bei der in vivo-Replikation der DNA von Simian Virus 40 (SV40). Am SV40-Modell sollen (a) der regulatorische Weg der schnellen Replikationsregulation und (b) die molekularen Mechanismen der Replikon-Initiation, wie sie in vivo realisiert sind, weiter erforscht werden. Es ist geplant, mit Hilfe der 2D-Elektrophorese nach schnellen, d.h. innerhalb weniger Minuten nach relevanten pO2-Änderungen auftretenden, Änderungen des "Miniproteoms" der SV40-Minichromosomen zu suchen. Auf die Bedeutung möglicher Zielsequenzen für die Bindung regulatorischer Proteinen im SV40-Genom zielen Studien mit abgewandelten Ursprungs-flankierenden Regionen. Mit Hilfe der Kleinmolekülspezifischen Permeabilisierung SV40-replizierender Zellen durch a-Toxin aus S. aureus soll nach einem vermuteten, an der Regulation beteiligen niedermolekularen Faktor gesucht werden und der Metabolismus von Primer-RNA/DNA bei der Initiation studiert werden.