Reinigung, Klonierung und Untersuchungen zur Regulation der Hydroxyphenylpyruvat Reduktase aus Coleus blumei

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Die Hydroxyphenylpyruvat Reduktase (HPPR) ist ein Enzym der Rosmarinsäure (RA)-Biosynthese; im Biosynthesezweig von Tyrosin zum 4-Hydroxyphenyllactat katalysiert sie die NAD(P)H-abhängige Reduktion des 4-Hydroxyphenylpyruvats (pHPP). Neben der RA-Synthase, ist die HPPR spezifisch für die RA-Biosynthese und wahrscheinlich ein wichtiger regulatorischer Punkt. HPPR muß in Koordination mit der Hydroxyphenylpyruvat Dioxygenase die Verteilung von pHPP in die Biosynthesen von RA und Homogentisinsäure (der Vorstufe von Tocopherolen und Plastochinonen) steuern. Die HPPR bzw. ihr Gen ist auch keinem anderen Organismus bisher gereinigt oder kloniert worden. Zellkulturen von Coleus blumei mit einer hohen RA-Akkumulation eignen sich gut zur Reinigung der HPPR. Eine Anreicherung bis ca. 600-fach wurde bereits erzielt, jedoch müssen zusätzliche Reinigungsschritte eingeführt werden, um die HPPR identifizieren und mikorsequenzieren zu können. Dies wird dann die Klonierung der HPPR cDNA bzw. ihres Gens ermöglichen. Die regulatorische Rolle der HPPR bei der RA-Biosynthese und im Zusammenspiel mit der Biosynthese der Homogentisinsäure in den Pflanzenzellen soll durch Expressionsstudien beleuchtet werden.