単純分化微生物のプロテアーゼ・インヒビター間コミュニケーション

简单分化微​​生物中蛋白酶和抑制剂之间的通讯

• 批准号: 08760101
• 负责人: 田口 精一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760101/
• 关键词: 放線菌; プロテアーゼ; プロテアーゼインヒビター; 蛋白質間相互作用; 分子進化; 基質特異性; 構造・機能相関; 遺伝子発現制御

当初の研究実施計画にしたがい、まずSSI様インヒビター(SIL)生産菌の培養上清より精製単離したSILタンパク質の全一次構造決定と阻害特性の解析を行った。その結果、SSIの機能構造を形成する上で重要と考えられた部分は高度に保存されており、機能構造領域を浮き彫りにした。SILインヒビターの構造相同性を利用し、最大節約法と近隣結合法を用いて作成した進化系統樹は、生産菌自身の系統関係と正の相関があった。次にSSI消失変異株を取得したところ、胞子形成能の低下、生育速度の低下、プロテアーゼ生産の増大など多面的形質の変化が走査型電顕によって観察された。そこで、SSIと相互作用する菌体外の内因性標的プロテアーゼをアフィニティーカラムにて複数単離した。その一つ、SAM-P20の遺伝子クローニング、組換え発現を行った。構造/活性から、SAM-P20はキモトリプシン属の新メンバーであることがわかった。また、アルカリ領域、高温領域でも活性を有するユニークな性質を示した。SAM-P20のプロテアーゼ活性は明らかにSSIによって阻害を受けることがインビトロ実験において明らかとなった。SAM-P45遺伝子も同様の戦略により単離することに成功した。配列分析の結果から、本プロテアーゼは約110kDaから成る巨大前駆体が生合成され、少なくとも3段階のプロセシングを経て活性化されることが推定された。今後は、SAM-P20あるいはSAM-P45とSSIとの複合体形成の詳細な解析を実施する予定である。さらに、他の内因性標的酵素についても同様の研究を推進していくことを考えている。

At the beginning of the study, we planned to determine the resistance characteristics of bacteria (SIL), the supernatant of bacteria, the supernatant of bacteria, the concentration of SIL, the characteristics of resistance, and the analysis of resistance characteristics. According to the results of the test, the SSI machine can be used to form an important part of the computer system. Some of the computers are highly conserved, and the machine can be used in the field of floating system. The same kind of system was built by using the SIL method, the maximum temperature method was used to make the system system, and the bacterial system was used to improve the system system. The secondary SSI disappearing strain has the advantages of low cell formation energy, low growth rate, large and multifaceted morphology, low cell formation energy, low growth rate and low growth rate. The interaction between bacteria and SSI is related to the internal causes of bacteria in vitro. In the first place, SAM-P20 will make sure that you have a problem, and the organization will make a difference. Made

项目成果

Seiichi TAGUCHI et al.: "Taxonomic characterization of closely related Streptomyces spp.based on the amino acid sequence analysis of protease inhibitor proteins" FEMS Microbiol.Lett.135. 169-173 (1996)

Seiichi TAGUCHI 等人：“基于蛋白酶抑制剂蛋白的氨基酸序列分析密切相关的链霉菌属的分类学特征”FEMS Microbiol.Lett.135。

Seiichi TAGUCHI et al.: "Streptomyces serine protease (SAM-P20) : Recombinant production,characterization,and interaction with endogenous protease inhibitor" J.Bacteriol.177. 6638-6643 (1995)

Seiichi TAGUCHI 等人：“链霉菌丝氨酸蛋白酶 (SAM-P20)：重组生产、表征以及与内源蛋白酶抑制剂的相互作用”J.Bacteriol.177。

Seiichi TAGUCHI et al.: "Microbial secretion of biologically active human transforming growth factor α fased to the Streptomyces protease inhibitor" Gene. 159. 239-243 (1995)

Seiichi TAGUCHI 等人：“与链霉菌蛋白酶抑制剂结合的生物活性人转化生长因子 α 的微生物分泌”基因 159. 239-243 (1995)

田口精一: "蛋白質 核酸 酵素"蛋白質工学の進展"「放線菌における異種蛋白質分泌生産系」" 共立出版, 497 (1992)

Seiichi Taguchi：“蛋白质、核酸和酶”蛋白质工程进展“链霉菌中的异源蛋白质分泌生产系统”Kyoritsu Shuppan，497（1992）

Mahito TERABE et al.: "New subtilisin-trypsin inhibitors produced by Strepeomyces : Primary structures and their relationship to other proteinase inhibitors from Streptomyces" Biochim.Biophys.Acta. 1292. 233-240 (1996)

Mahito TERABE 等人：“链霉菌产生的新型枯草杆菌蛋白酶-胰蛋白酶抑制剂：初级结构及其与链霉菌其他蛋白酶抑制剂的关系”Biochim.Biophys.Acta。