ラミニン結合タンパク37LBP/p40を応用した肺癌細胞ターゲッティングの試み

尝试使用层粘连蛋白结合蛋白 37LBP/p40 靶向肺癌细胞

• 批准号: 09877115
• 负责人: 佐藤 研
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877115/
• 关键词: ラミニン; レセプター; 肺癌; 転移; 抗体; ペプチド; ターゲッティング; 組換え体; ラミニンレセプター; クローニング; 発現ベクター

1)37LBP/p40のリガンドであるラミニン由来のペプチド(YIGSR)とレポータ遺伝子を発現するplasmid(pBCLuc)とをpoly-L-lysineを介して結合させた。得られたペプチド-プラスミド複合物(LNpLuc)を37LBP/p40発現の亢進している小細胞肺癌SBC3,肺腺癌A549に特異的に取り込ませることが可能か否かを,37LBP/p40発現の低い肺腺癌PC3,肺扁平上皮癌Lu4を対照として検討した。その結果,必ずしも37LBP/p40発現の亢進とLNpLucによるレポータ遺伝子(ルシフェラーゼ)の発現程度に相関を見出せなかったので,次の研究計画「37LBP/p40プロモータのクローニングとLnpLucへの組み込み」は見送りとし,計画を再考した。2)次に,肺癌細胞表面抗原を認識する抗体を用いたターゲッティングに目的を定め,上記ラミニン由来ペプチド(YIGSR)を認識する37LBP/p40の機能ドメイン(ペプチドG領域),あるいはその配列を含む組み替え体(r37LBP/p40)と,それらに対する抗体を数種作成した。(作成した抗体は,ペプチド抗体としてポリクローナル抗体3種とモノクローナル抗体1種,及び抗r37LBP/p40抗体2種。)そのうちIgG型ポリクローナル抗体である抗r37LBP/p40抗体(P4G)は肺癌細胞表面の37LBP/p40を最も感度良く認識し,SBC3,A549や線維肉腫細胞HT1080のラミニンへの接着能を濃度依存的に阻害した。また,予めP4G抗体と培養したHT1080細胞をヌードマウスに静脈注射した結果,実験的肺転移の著しい減少が認められた(マウス肺当たり3.3±5.1個,対照では58.0±38.0個,p<0.005)。以上の結果から,P4G抗体は癌細胞表面に高発現している37LBP/p40をターゲッティングする癌転移抑制への応用が期待される。さらに癌細胞の接着能や転移能抑制に関してペプチド(YIGSR)と有効性を比較検討する必要があるが,将来的に化学療法剤を結合して癌のターゲッティングを目指そうとする場合,結合技術の容易さから抗体の優位性が予想される。

1) 37LBP/p40 YIGSR YIGSR It is a combination of plasmid (pBCLuc) and poly-L-lysine.られたペプチド-プラスミド complex (LNpLuc) を37LBP/p40発appears to be hyperactive している small cell lung cancer SBC3, lung adenocarcinoma A549 The specific ones are り込ませることがpossible かかを, 37LBP/p40 発appears のlow の lung adenocarcinoma PC3, and pulmonary squamous cell carcinoma Lu4 を対毕として検 Discussion した.その results, it must be ずしも37LBP/p40発 appear no hyperactivity とLNpLucによるレポータ伝子(ルシフェラーゼ)の発appearance degree related を见出せなかったので, Tsu's research project 「37LBP/p40プロモータのクローニングとLnpLucへの集团み込み」は见发りとし,planningをre-examinationした. 2) times, lung cancer cell surface antigen を recognition する antibody を いたターゲッティングにpurpose をdetermination め, the origin of ラミニンペプチド (YIGSR) を cognition 37LBP /p40のfunctionalityドメイン(ペプチドG field),あるいはその配arrayをcontainingむgroupみSeveral types of antibodies have been prepared for the antibody (r37LBP/p40). (Made of three types of antibodies, three types of antibodies, three types of antibodies, one type of antibodies, and one type of antibodies, and 2 types of anti-r37LBP/p40 antibodies) そのうちIgG type ポリクローナルantibody であるanti-r37. LBP/p40 antibody (P4G) has the best sensitivity and good recognition on the surface of lung cancer cells, SBC3, A549 and HT1080, which are used in line-dimensional sarcoid cells, and can block the damage in a concentration-dependent manner. After intravenous injection of P4G antibody, cultured HT1080 cells and intravenous injection of P4G antibody, the result was that the lungs of the patient were transferred. There was a decrease in いめられた (マウス洉たり3.3±5.1 pieces, 対毬では58.0±38.0 pieces, p<0.005). The above results indicate that the P4G antibody has shown high growth on the surface of cancer cells and is expected to be effective in inhibiting cancer migration. The subsequent migration of cancer cells can be suppressed, and the effectiveness of YIGSR (YIGSR) is relatively high, and the future is necessary. The combination of chemotherapy and cancer treatment is easy, and the advantages of the antibody and the superiority of the antibody are the same.

项目成果

Narumi K.et al.: "Inhibition of experimental metartasis of human fibro sarcoma cells・・・・" Jap.J.Cancer.Res. 90(in press). (1999)

Narumi K. 等人：“人类纤维肉瘤细胞的实验性转移的抑制......”Jap.J.Cancer.Res 90（出版中）。

Kikuchi T.et al.: "Structure of the murine secvetory leukoprotease inhibitor gene・・・" Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol. 19. 875-880 (1998)

Kikuchi T. 等人：“鼠分泌白细胞蛋白酶抑制剂基因的结构……”Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol. 19. 875-880 (1998)

Sakai T.et al: "Hepatocyte growth factor in bronchoalveolan lavage fluid・・・" Am.J.Rispir.Cell.Mol.Biol.16. 388-397 (1997)

Sakai T. 等人：“支气管肺泡灌洗液中的肝细胞生长因子......”Am.J.Rispir.Cell.Mol.Biol.16 (1997)。

Hara K.et al.: "Atypical ectodermal ridge dependent expression of 67KDa laminin・・・" Zool.Sci.14. 969-978 (1997)

Hara K. 等人：“67KDa 层粘连蛋白的非典型外胚层脊依赖性表达……”Zool.Sci.14 (1997)。

佐藤 研 ら: "細胞外マトリックス-基礎と臨床-" 愛智出版(小出輝ら編集), 440 (1999)

Ken Sato 等：“细胞外基质 - 基础和临床 -”爱知出版（Teru Koide 等编辑），440（1999）