ラミニン結合タンパク37LBP/p40を応用した肺癌細胞ターゲッティングの試み

尝试使用层粘连蛋白结合蛋白 37LBP/p40 靶向肺癌细胞

• 批准号: 09877115
• 负责人: 佐藤 研
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877115/
• 关键词: ラミニン; レセプター; 肺癌; 転移; 抗体; ペプチド; ターゲッティング; 組換え体; ラミニンレセプター; クローニング; 発現ベクター

1)37LBP/p40のリガンドであるラミニン由来のペプチド(YIGSR)とレポータ遺伝子を発現するplasmid(pBCLuc)とをpoly-L-lysineを介して結合させた。得られたペプチド-プラスミド複合物(LNpLuc)を37LBP/p40発現の亢進している小細胞肺癌SBC3,肺腺癌A549に特異的に取り込ませることが可能か否かを,37LBP/p40発現の低い肺腺癌PC3,肺扁平上皮癌Lu4を対照として検討した。その結果,必ずしも37LBP/p40発現の亢進とLNpLucによるレポータ遺伝子(ルシフェラーゼ)の発現程度に相関を見出せなかったので,次の研究計画「37LBP/p40プロモータのクローニングとLnpLucへの組み込み」は見送りとし,計画を再考した。2)次に,肺癌細胞表面抗原を認識する抗体を用いたターゲッティングに目的を定め,上記ラミニン由来ペプチド(YIGSR)を認識する37LBP/p40の機能ドメイン(ペプチドG領域),あるいはその配列を含む組み替え体(r37LBP/p40)と,それらに対する抗体を数種作成した。(作成した抗体は,ペプチド抗体としてポリクローナル抗体3種とモノクローナル抗体1種,及び抗r37LBP/p40抗体2種。)そのうちIgG型ポリクローナル抗体である抗r37LBP/p40抗体(P4G)は肺癌細胞表面の37LBP/p40を最も感度良く認識し,SBC3,A549や線維肉腫細胞HT1080のラミニンへの接着能を濃度依存的に阻害した。また,予めP4G抗体と培養したHT1080細胞をヌードマウスに静脈注射した結果,実験的肺転移の著しい減少が認められた(マウス肺当たり3.3±5.1個,対照では58.0±38.0個,p<0.005)。以上の結果から,P4G抗体は癌細胞表面に高発現している37LBP/p40をターゲッティングする癌転移抑制への応用が期待される。さらに癌細胞の接着能や転移能抑制に関してペプチド(YIGSR)と有効性を比較検討する必要があるが,将来的に化学療法剤を結合して癌のターゲッティングを目指そうとする場合,結合技術の容易さから抗体の優位性が予想される。

1)37LBP/p40 is composed of a plasmid(pBCLuc) and poly-L-lysine. The results showed that the complex (LNpLuc) with 37LBP/p40 was found to be hyperactive in small cell lung cancer SBC3 and lung adenocarcinoma A549, and that the complex (LNpLuc) with 37LBP/p40 was found to be hyperactive in low cell lung adenocarcinoma PC3 and lung squamous carcinoma Lu4. The results show that the correlation between the occurrence of 37LBP/p40 hyperactivity and LNpLuc activity is obvious. The second research project "37LBP/p40 hyperactivity and LNpLuc activity" is re-examined. 2)In addition, lung cancer cell surface antigen recognition of antibodies used in the middle of the target set, note the origin of the selection (YIGSR) to recognize the function of 37LBP/p40, including the selection of G domain, and in the middle of the alignment of the antibody, including the replacement body (r37LBP/p40), several kinds of preparation. (3 kinds of antibodies, 1 kind of antibody, and 2 kinds of anti-r37 LBP/p40 antibodies were prepared.) The antibody against r37 LBP/p40 (P4G) was most sensitive to lung cancer cell surface, and the adhesion of HT1080 to SBC3,A549 and linear sarcoma cells was concentration-dependent. When HT1080 cells were cultured with P4G antibody and injected intravenously, the number of lung metastases decreased significantly (3.3±5.1 versus 58.0±38.0,p<0.005). These results suggest that P4G antibodies are highly expressed on cancer cell surfaces and are expected to inhibit cancer migration. In the future, it is necessary to combine chemotherapy agents with cancer cells and to compare the efficacy of YIGSR.

项目成果

Narumi K.et al.: "Inhibition of experimental metartasis of human fibro sarcoma cells・・・・" Jap.J.Cancer.Res. 90(in press). (1999)

Narumi K. 等人：“人类纤维肉瘤细胞的实验性转移的抑制......”Jap.J.Cancer.Res 90（出版中）。

Kikuchi T.et al.: "Structure of the murine secvetory leukoprotease inhibitor gene・・・" Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol. 19. 875-880 (1998)

Kikuchi T. 等人：“鼠分泌白细胞蛋白酶抑制剂基因的结构……”Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol. 19. 875-880 (1998)

Sakai T.et al: "Hepatocyte growth factor in bronchoalveolan lavage fluid・・・" Am.J.Rispir.Cell.Mol.Biol.16. 388-397 (1997)

Sakai T. 等人：“支气管肺泡灌洗液中的肝细胞生长因子......”Am.J.Rispir.Cell.Mol.Biol.16 (1997)。

Hara K.et al.: "Atypical ectodermal ridge dependent expression of 67KDa laminin・・・" Zool.Sci.14. 969-978 (1997)

Hara K. 等人：“67KDa 层粘连蛋白的非典型外胚层脊依赖性表达……”Zool.Sci.14 (1997)。

佐藤 研 ら: "細胞外マトリックス-基礎と臨床-" 愛智出版(小出輝ら編集), 440 (1999)

Ken Sato 等：“细胞外基质 - 基础和临床 -”爱知出版（Teru Koide 等编辑），440（1999）