腎メサンギウム細胞におけるグルタミン連続配列遺伝子のクローニング

肾系膜细胞谷氨酰胺连续序列基因的克隆

• 批准号: 09877218
• 负责人: 丹羽 利充
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877218/
• 关键词: グルタミン連続配列; 遺伝子多系性; メサンギウム細胞

メサンギウム細胞から、グルタミン連続配列(CAGリピート)を有する遺伝子をクローニングするため、培養ラットメサンギウム細胞から抽出したRNAを鋳型にして、CAGリピートを含むプライマー(センス)と、oligo dTプライマー(アンチセンス)を用いたrandomRT-PCR法によって、CAGリピートを有するcDNA断片を16個クローニングした。そのうち、ラットKIMI-1と名付けたcDNAは5′RACEによってその5′断片をクローニングして全塩基配列(1.8kb)を決定した。ラットKIMI-1遺伝子がコードする蛋白は 122個のアミノ酸から成り、グルタミンの9回繰り返し配列を持つ新しい蛋白であり、最近報告されたマウスFas制御因子(TDA51、グルタミンの繰り返しは8回)に高い相同性を有することが明らかになった。KIMI-1が転写制御因子であるか否かを検討するため、KIMI-1と酵母の転写因子GAL4のDNA結合ドメインとの融合蛋白として発現するプラスミドを、GAL4結合配列をルシフエラーゼ遺伝子の上流に組み込んだプラスミドとともにヒト絨毛癌由来の細胞株JEG3で発現させ、ルシフェラーゼ活性を測定したが有意な変化はなく、KIMI-1が転写制御因子である可能性は否定的であった。しかし、KIMI-1はTDAG51との高い相同性をもつことからから、アポトーシスに関わる可能性が高く、重要な蛋白であることが予想された。ヒトではGAGリピートの数がしばしば多系性を示すため、腎不全患者20例から抽出されたDNAについてヒトKIMI-1のCAGリピートの数について検討した。17例がCAGリピート14回のホモであり、2例がCAGリピート14回と13回、10回の各ヘテロであることが明らかとなり、KIMI-1は遺伝子多系性のマーカーになりうることか示唆された。来年度はKIMI-1の機能をさらに検討するとともに、ヒトKIMI-1のCAGリピートの多系と疾患(特に腎疾患)との関連について検討する。

CAG リピート)を有する伝子をクローニングするため、nurturing ラットメサンギウムcell extraction したRNA 鋳 type にして, CAG リピートをcontaining むプライマー(センス)と, oligo dTプライマー(アンチセンス)をいたrandomRT-PCR methodによって, CAG リピートを has 16 クローニングした of するcDNA fragments.そのうち、ラットKIMI-1とnamefu けたcDNAは5′RACE によってその5′ fragment をクローニングして全婩组array(1.8kb)をdeterminationした.ラットKIMI-1弝子がコードするproteinは122 pieces of のアミノ sour から成り, グルタミンの9缲り回し配arrayをhold つ新しいprotein であり, latest report されたマウスFas control factor (TDA51, グルタミンの缲り回しは8 times) に高い Sameness を有することが明らかになった. KIMI-1が転WRITING CONTROL FACTOR であるかNOかを検多するため、KIMI-1とYeast の転WRITING FACTOR GAL4のDNA-binding fusion protein fusion protein fusion protein fusion protein fusion protein, GAL4-binding fusion protein fusion protein fusion protein伝子の上に集团み込んだプラスミドとともにヒトVillous carcinoma origin cell line JEG3 で発成させ、ルシフェラーゼActivity を Measurement し た が Intentional change は な く, KIMI-1 転 written control factor で あ る possibility は denies で あ っ た.しかし、KIMI-1はTDAG51との高い Sameness をもつことからから、アポトーシスに关わるThe possibility is high く, the important なprotein であることが conceived and thought された.ヒトではGAGリピートの数がしばしば Polyphyletic disease and renal insufficiency: 20 cases of patients出されたDNAについてヒトKIMI-1のCAGリピートのnumberについて検した. 17 cases of がCAG リピート14 times of のホモであり, 2 cases of がCAG リピート14 times and 13 times, 10 times of のヘテロであることが明らかとなり, KIMI-1は缝子多 Lineage のマーカーになりうることか时攆された. The functions of KIMI-1 in the coming year will be discussed in the following chapters: KIMI-1のCAGリピートのmulti-system diseases (especially kidney disease) and related diseases.