免疫細胞指向性ナノ粒子によるNFkB転写制御と移植拒絶抑制への応用

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本年度は、これまでに開発したキャリアシステムを用いin vivoにおけるNFκB転写制御および移植拒絶抑制への応用展開を行う。移植において血流の一時的な遮断と再開は局所的に活性酸素濃度を増大させ、マクロファージやKupffer細胞などの免疫細胞のNFκB活性化、炎症性サイトカイン産生によりに炎症を誘発する。まず、NFκB活性化抑制可能なNFκBデコイのKupffer細胞選択的送達による虚血際灌流傷害抑制をおこなった。蛍光標識NFκBデコイとフコースリポソームの複合体を肝虚血再灌流モデルマウスへ投与後、組織切片の観察により、投与タイミングによるデリバリー効率の最適化を行ったところ、再灌流1分前投与により肝臓への集積が最も高かった。次に、この投与タイミングで複合体投与後の血清中のサイトカイン(TNFα、IL-1βおよびIL-6)を測定したところ、NFκBデコイ単独投与またはrandomデコイの複合体投与ではサイトカインの抑制効果はほとんど認められなかったが、NFκBデコイの複合体投与において有意な抑制効果が認められた。さらに、組織切片の形態学的観察において、NFκBデコイ複合体を投与したマウスの肝臓にはほとんど炎症部位が認められなかった。また肝炎症の指標である血清中のALT、ASTの上昇もNFκBデコイの複合体により有意に抑制できた。最後に、心移植ラットモデルを作成し、移植により誘発された心組織内のNFκB活性化並びに炎症性サイトカインの産生をmRNAレベルで評価を行ったところ、全身のマクロファージへのデリバリーを目的にNFκBデコイとマンノースリポソームの複合体の投与により有意な抑制効果が認められた。以上、NFκBデコイの免疫細胞指向性キャリアによりNFκBデコイの細胞選択的送達システムを構築し、in vivoでの炎症および移植拒絶におけるNFκB転写制御が可能になった。