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人黒色腫メラノソーム関連蛋白に対する単クローン抗体作製と免疫診断法の確立

人黑色素瘤黑素体相关蛋白单克隆抗体的制备及免疫诊断方法的建立

基本信息

批准号：
60015083
负责人：
神保孝一
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

メラノソーム産生は悪性黒色腫にとり特異な分化形質発現である。メラノソームの生化学的・超微構造的特徴は、癌化に併い極めて修飾を受け、人黒色腫では病型によってその特性が特徴ずけられうる。本研究は、1)メラノソーム関連蛋白に対しマウス・ハイブリドーマの手枝を用い、単クローン抗体を作製し、2)癌化に伴う細胞の分化形質発現の異常とその特異性を解明し、3)得られる結果を直接臨床に応用し、黒色腫の免疫診断法を確立する、これら3点を目的としている。結果:1)ヒト黒色腫メラノソーム関連蛋白に対する単クローン抗体の作製;現在6種類の単クローン抗体は各々MoAb HMSA-1,2と呼ばれ、IgG,K型である。残りの4種類は全てIgM型である。2)HMSA-1,HMSA-2,3A3,5B3はフォルマリン固定、パラフィン切片と反応する。残りの5A1,3B5は凍結切片とのみ反応する。3)HMSA-1,HMSA-2は極めて類似の組織反応をとるが、SDS-PAGE下で認識する抗原蛋白の分子量は異っていた。免疫電顕型にてこれら抗原蛋白は、滑面小胞体、メラノソーム中に含まれ、ゴルジー装置とは直接の関連のない事、チロシナーゼとは異なり、メラノソーム構造蛋白とその前駆物質である事が分った。しかも、正常メラノサイトとは反応せず、腫瘍化メラノサイトとのみ反応し、更に黒色腫と母斑とでは反応様式が全く異っていた。従い、本研究にて得られたMoAb HMSA-1,2は、従来の単クローン抗体とは異なるものであり、しかも免疫病理診断に極めて有効である事が分った。4)現在、HMSA-1抗原蛋白の精製をMoAbを利用したaffinrty column,HPLCを用い分離、精製中であるが、単一体に近い形で精製されつつある。精製抗原蛋白は、アミノ酸組成、cDNAの確立に用いられる予定である。またRIA法は、現在、予備実験中である。3A3,5B3,5A1,3B5の特異性も現在検討中である。精製抗原を用いたRIA法、competitive ELISAにて、担癌宿主の流血中の抗原量のアッセイ系の確立中である。

The color of the skin is black, and the color of the skin is black. The biochemical and ultrastructural characteristics of the disease are characterized by cancer and extreme modification, and human melanoma is characterized by disease type. This study is aimed at: (1) the use of anti-tumor-related proteins,(2) the elucidation of the specificity of abnormal cellular differentiation associated with cancer,(3) the establishment of immunodiagnostic methods for melanoma, and (4) the establishment of diagnostic methods for melanoma Results:1) The production of anti-HMSA antibodies against different types of proteins was studied. 6 types of anti-HMSA antibodies were produced. 2) The anti-HMSA antibodies were produced against different types of proteins. The remaining four species are all IgM. 2)HMSA-1,HMSA-2, 3A3, 5B3 were fixed, sliced and re-sliced. 5A1,3B5 3)HMSA-1 and HMSA-2 were similar in structure and molecular weight of antigen proteins were different by SDS-PAGE. The immune response pattern includes antigen, protein, protein. For example, if you want to change the color of your skin, you can change the color of your skin. MoAb HMSA-1,2 was found in this study. 4)Now, purification of HMSA-1 antigen protein MoAb is separated and purified by HPLC. Refined antigen protein, protein composition, cDNA establishment, and use of pre-determined protein. The law of RIA is now ready. 3A3, 5B 3,5A1,3B5 and specificity are now discussed. The use of purified antigens in RIA, competitive ELISA, and the establishment of a complete system of antigen amounts in the blood of cancer-bearing hosts are common.