人黒色腫メラノソーム関連蛋白に対する単クローン抗体作製と免疫診断法の確立

人黑色素瘤黑素体相关蛋白单克隆抗体的制备及免疫诊断方法的建立

• 批准号: 60015083
• 负责人: 神保 孝一
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60015083/
• 关键词: 単クローン抗体; メラノーマ; メラノソーム; 免疫組織化学; 免疫病理診断法; ラジオイミュノアッセイ法

メラノソーム産生は悪性黒色腫にとり特異な分化形質発現である。メラノソームの生化学的・超微構造的特徴は、癌化に併い極めて修飾を受け、人黒色腫では病型によってその特性が特徴ずけられうる。本研究は、1)メラノソーム関連蛋白に対しマウス・ハイブリドーマの手枝を用い、単クローン抗体を作製し、2)癌化に伴う細胞の分化形質発現の異常とその特異性を解明し、3)得られる結果を直接臨床に応用し、黒色腫の免疫診断法を確立する、これら3点を目的としている。結果:1)ヒト黒色腫メラノソーム関連蛋白に対する単クローン抗体の作製;現在6種類の単クローン抗体は各々MoAb HMSA-1,2と呼ばれ、IgG,K型である。残りの4種類は全てIgM型である。2)HMSA-1,HMSA-2,3A3,5B3はフォルマリン固定、パラフィン切片と反応する。残りの5A1,3B5は凍結切片とのみ反応する。3)HMSA-1,HMSA-2は極めて類似の組織反応をとるが、SDS-PAGE下で認識する抗原蛋白の分子量は異っていた。免疫電顕型にてこれら抗原蛋白は、滑面小胞体、メラノソーム中に含まれ、ゴルジー装置とは直接の関連のない事、チロシナーゼとは異なり、メラノソーム構造蛋白とその前駆物質である事が分った。しかも、正常メラノサイトとは反応せず、腫瘍化メラノサイトとのみ反応し、更に黒色腫と母斑とでは反応様式が全く異っていた。従い、本研究にて得られたMoAb HMSA-1,2は、従来の単クローン抗体とは異なるものであり、しかも免疫病理診断に極めて有効である事が分った。4)現在、HMSA-1抗原蛋白の精製をMoAbを利用したaffinrty column,HPLCを用い分離、精製中であるが、単一体に近い形で精製されつつある。精製抗原蛋白は、アミノ酸組成、cDNAの確立に用いられる予定である。またRIA法は、現在、予備実験中である。3A3,5B3,5A1,3B5の特異性も現在検討中である。精製抗原を用いたRIA法、competitive ELISAにて、担癌宿主の流血中の抗原量のアッセイ系の確立中である。

Youdaoplaceholder0 メラノソ ム ム produces 悪 悪 blackened edema にと <s:1> specific な differentiation and appearance である. メ ラ ノ ソ ー ム の of biochemistry, the ultrastructural of 徴 は, cancer に and い め て modified を け, one black color swollen で は disease type に よ っ て そ の features が, 徴 ず け ら れ う る. は, this study 1) メ ラ ノ ソ ー ム masato even protein に し seaborne マ ウ ス · ハ イ ブ リ ド ー マ の を い, hand branches 単 ク ロ ー ン し the antibody を cropping and 2) cancer に う cells の character 発 is の abnormal と そ の specificity を interpret し, 3) ら れ る results を direct clinical に 応 し, black color is swollen の immune diagnosis method を establish す る, こ れ ら を at 3 Youdaoplaceholder0 て て る る. Result :1) The ヒト black tumor メラノソ ム ム associated protein に was prepared against the する単 ロ ロ ロ <s:1> <s:1> antibody. Now there are 6 types of types 単, ロ, <s:1>, <s:1> antibodies <e:1> each 々MoAb hmsa-1,2と hu ばれ, IgG,K type である. Residual て て type 4 て all てIgM type である. 2)HMSA-1, hmsa-2, 3a3,5B3 フォ フォ リ リ リ リ リ fixation, パラフィ <e:1> section と reverse 応する. Residual <s:1> <s:1> 5A1,3B5 <s:1> frozen section と み み inverse 応する. HMSA - 1, 3) HMSA - 2 は extremely め て similar の organization against 応 を と る が, under the sds-page で す る の antigen protein molecular weight は different っ て い た. Immune type electric 顕 に て こ れ ら antigen protein は, small cell body, sliding surface メ ラ ノ ソ ー ム に in containing ま れ, ゴ ル ジ ー device と は directly の masato even の な い, チ ロ シ ナ ー ゼ と は different な り, メ ラ ノ ソ ー ム structure protein と そ の 駆 material before で あ る matter が points っ た. し か も, normal メ ラ ノ サ イ ト と は anti 応 せ ず, swollen sores change メ ラ ノ サ イ ト と の み anti 応 し, more に black color swollen と と nevoid で は anti 応 others type が く all different っ て い た. 従 い, this study に て have ら れ た MoAb HMSA は - 1, 2, 従 の 単 ク ロ ー ン antibody と は different な る も の で あ り, し か も immune pathological diagnosis に extremely め て have sharper で あ る matter が points っ た. 4) now, HMSA 1 antigen protein の refined を MoAb を using し た affinrty column and HPLC を in い separation, refined で あ る が, integration 単 に nearly い で refined さ れ つ つ あ る. The acid composition of the refined antigen protein ア and ア ノ ノ, as well as the establishment of cDNA <s:1>, are determined by に られる られる. Youdaoplaceholder0 RIA method また, present, in the preparatory experiment である. 3A3,5B3,5A1,3B5 <s:1> specificity 検 is presented in 検 である. The refined antigen を was determined by the を たRIA method, competitive ELISAにて, and the amount of <s:1> antigen in the blood of the cancer host <s:1> アッセ <s:1> was in the process of determining である.

项目成果

Proc.Jpn.Soc.Invest.Dermatol.9. 173-174 (1985)

Proc.Jpn.Soc.Invest.Dermatol.9。

Cancer Res.(1986)Cancer.

癌症研究（1986）癌症。

Cancer. 55. 721-727 (1985)

癌症。

Cancer Res.(1986)

癌症研究（1986）