Funktionsanalyse von Keratin-Interaktionen mittels RNAi und homologer Rekombination in humanen Keratinozyten

基因敲除-Mäusen MIT Hilfe von“基因打靶”(同源重组)在胚胎Stammzellen der Maus ist zum中的基因定位功能分析von Genen geworden。这是一位来自德国的变种人，他说：“这是一件非常重要的事情。”在Jüngster Zeit sind“基因打靶”-Verfahren entwickelt Worden中，麻省理工学院的Deren Hilfe基因在Somatischen Zellen gezielt Modifiziert中被Knnnnen.我是vvliegenden Antrag Sollen Dolch同源重组在人的角蛋白细胞中的gezielte Mutationen中-基因eingeführt den，Wie sie in erblichen Human en Hauterkrankungen，Z.B.大疱性表皮松解症单纯性(EBS)chrieben Worden sind.在器官类型和定义的机制下，它们是完整的和不同的角质细胞。AuüErdem soll das Grün Folreszierende Protein(GFP)ALS modell für ein在das keratin5-Gen整合体中重组同源基因，das der basalen epdermis aktivist.在Zellkulture和NACH移植体内成功表达了Eignung von Keratin-Promotoren für eine langzeitige基因。Langfristig ermöglicht die Eablierung von基因打靶-Verfahren在角质形成细胞中表达Möglichkeit，die Auswirkung mehreren auf die表达和Interaktion von Proteinen in einem komplexen Zellkultursystem zu analysieren。

Die Etablierung von "knockout"-Mäusen mit Hilfe von "gene targeting" (homologe Rekombination) in embryonalen Stammzellen der Maus ist zum wichtigsten Hilfsmittel für die Funktionsanalyse von Genen geworden. Die hohen Kosten und die langen Zeiträume für die Herstellung transgener Mäuse sind ein großes Hindernis bei der Charakterisierung multipler Mutationen, wie sie bei zahlreichen menschlichen Erbkrankheiten vorkommen. In jüngster Zeit sind "gene targeting"-Verfahren entwickelt worden, mit deren Hilfe auch Gene in somatischen Zellen gezielt modifiziert werden können.Im vorliegenden Antrag sollen durch homologe Rekombination in humanen Keratinocyten gezielte Mutationen in epidermale Keratin-Gene eingeführt werden, wie sie in erblichen humanen Hauterkrankungen, z.B. Epidermolysis bullosa simplex (EBS) beschrieben worden sind. Die Auswirkung dieser Mutationen auf die Integrität und Differenzierungsleistung von Keratinocyten soll unter organotypischen Kulturbedingungen und unter definiertem mechanischen Streß charakterisiert werden. Außerdem soll das grün fluoreszierende Protein (GFP) als Modell für ein Transgen durch homologe Rekombination in das Keratin 5-Gen integriert werden, das in der basalen Epidermis aktiv ist. Damit soll die Eignung von Keratin-Promotoren für eine langzeitige Genexpression in Zellkultur und, nach Transplantation, in vivo untersucht werden. Langfristig ermöglicht die Etablierung von gene targeting-Verfahren in Keratinocyten die Möglichkeit, die Auswirkung mehrerer Mutationen auf die Expression und Interaktion von Proteinen in einem komplexen Zellkultursystem zu analysieren.