Funktionsanalyse von Keratin-Interaktionen mittels RNAi und homologer Rekombination in humanen Keratinozyten

Die Etablierung von“敲除”-Mäusen mit Hilfe von“基因靶向”（同源重组）在胚胎干细胞Stammzellen der Maus ist zum中，与Hilfsmittel fgr Die Funktionsanalyse von Genen geworden。德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国德国在jngster Zeit上发表了“基因靶向”-Verfahren entwickelt worden, mit deren Hilfe auch gene In somatischen Zellen gezielt modifiziert werden können。[3]人表皮角化蛋白基因重组研究[j] .人表皮角化蛋白基因重组研究[j] .大疱性单纯表皮松解症（EBS） [j]。在组织型、培养、确定机制、应力特性等方面，角化细胞的突变与分化研究进展顺利。在角蛋白5-Gen整合体中，在der basalen Epidermis aktivist中，Außerdem soll das grn荧光蛋白（GFP） als模型中，r - in转基因同源重组。角蛋白促进因子基因在细胞培养和移植中的表达，体外实验研究。Langfristig ermöglicht die Etablierung von基因靶向- verfahren在角质形成细胞死亡Möglichkeit， die Auswirkung mehrer突变，死亡表达和相互作用的蛋白质在einem复合体zellcultursystem zu分析。

Die Etablierung von "knockout"-Mäusen mit Hilfe von "gene targeting" (homologe Rekombination) in embryonalen Stammzellen der Maus ist zum wichtigsten Hilfsmittel für die Funktionsanalyse von Genen geworden. Die hohen Kosten und die langen Zeiträume für die Herstellung transgener Mäuse sind ein großes Hindernis bei der Charakterisierung multipler Mutationen, wie sie bei zahlreichen menschlichen Erbkrankheiten vorkommen. In jüngster Zeit sind "gene targeting"-Verfahren entwickelt worden, mit deren Hilfe auch Gene in somatischen Zellen gezielt modifiziert werden können.Im vorliegenden Antrag sollen durch homologe Rekombination in humanen Keratinocyten gezielte Mutationen in epidermale Keratin-Gene eingeführt werden, wie sie in erblichen humanen Hauterkrankungen, z.B. Epidermolysis bullosa simplex (EBS) beschrieben worden sind. Die Auswirkung dieser Mutationen auf die Integrität und Differenzierungsleistung von Keratinocyten soll unter organotypischen Kulturbedingungen und unter definiertem mechanischen Streß charakterisiert werden. Außerdem soll das grün fluoreszierende Protein (GFP) als Modell für ein Transgen durch homologe Rekombination in das Keratin 5-Gen integriert werden, das in der basalen Epidermis aktiv ist. Damit soll die Eignung von Keratin-Promotoren für eine langzeitige Genexpression in Zellkultur und, nach Transplantation, in vivo untersucht werden. Langfristig ermöglicht die Etablierung von gene targeting-Verfahren in Keratinocyten die Möglichkeit, die Auswirkung mehrerer Mutationen auf die Expression und Interaktion von Proteinen in einem komplexen Zellkultursystem zu analysieren.