モジュール構造対応ペプチドの発現ならびに構造と機能

模块化肽的表达、结构和功能

• 批准号: 62220022
• 负责人: 橘 秀樹
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62220022/
• 关键词: 蛋白質部品; 遺伝子特定断片; 発現ベクター; エキソヌクレアーゼ

蛋白質の構造と機能を, 遺伝子工学の手法により実用的になったアミノ酸置換の影響を通して探ろうとする研究が多いが, モジュール構造のような, 2次構造と3次構造の中間に位置し, 蛋白質の構造・機能の単位と思われるものに着目した研究は非常に少ない. この研究では, 蛋白質の「部品」構造に対応すると思われる部分蛋白を作製して, その構造と機能を調べることを目的としている. そのために, 昨年度は, 特定の蛋白質部分をリンカー等に由来する外来のアミノ酸配列を含まずに直接発現できる, 新しい発現ベクター, ATG-TAG直接発現ベクター, を開発した. 今年度は, そのベクターに挿入する, 蛋白質の特定部分に対応する遺伝子断片を得ることを目的とした. 一般に目的の部位に丁度制限酵素認識部位が存在する確率は低いので, エキソヌクレアーゼを用いてDNAを削ったものの中から, 目的の部位まで削れたものを選択する方法の開発を試みた. 予め導入された, ある制限酵素認識部位の一部を提供する一端と, エキソヌクレアーゼで削られた他端とをライゲートしてプラスシドを再環化し, 目的のクローンでのみその制限酵素認識部位が再生することを利用して選択する方法は, 数百〜千個のクローンを対象として制限酵素切断アッセイを行う必要があり, 効率が悪い. そこで, 再環化の段階で環化せずに残った線状分子を特異的に除去し, 次にその再生部位で切断を受けて線状化する目的のプラスシドのみ, 薬剤耐性遺伝子を導入することによって, ポジティヴに選択するという手法を考案した. この手法中, 線状分子を特異的に除去するステップでは, 熱耐性差を利用する, あるいはエキソヌクレアーゼを用いる方法が有効なことがわかった. しかし, 各ステップにおける収率やゲル中の酵素活性抑制物質のために, 現在までの所, 最終的な成功には至っていない. 今後, これらの点の改良を行ってゆく予定である.

The structure and function of protein are studied in many ways, but the structure and function of protein are studied in very few ways. This research is aimed at the structural and functional modulation of protein components. In the past year, specific protein components have been identified, such as the origin of exogenous acid sequences, including direct discovery, new discovery, ATG-TAG direct discovery, and development. This year, the protein fragments of a specific part of the protein were identified. In general, the accuracy rate of the target site is low, and the target site is selected. To introduce the restriction enzyme recognition site, a part of the site is provided, one end is provided, the other end is provided, the target site is provided, the restriction enzyme recognition site is regenerated, the method is selected, hundreds to thousands of sites are provided, the restriction enzyme recognition site is provided, and the efficiency is improved. In this case, the specific removal of the residual linear molecule in the cyclization stage, the secondary regeneration site, and the introduction of the resistant molecule are examined. In this way, the linear molecule is removed from the heat resistance. The enzyme activity inhibitor in each category is present, and the ultimate success is achieved. In the future, the improvement of the new system will be determined.