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リゾチームのフォールディングにおける各SS結合の役割

每个 SS 键在溶菌酶折叠中的作用

基本信息

批准号：
08272219
负责人：
橘秀樹
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08272219/
关键词：
蛋白質リゾチームフォールディングジスルフィド結合

项目摘要

1.ニワトリリゾチームの1SS体の4種を用い、各SS結合に関わるCys残基の実効濃度を決定した。ネイティブ溶液条件下での実効濃度はSS3が一番高く、SS1が一番低い。蛋白質の立体構造形成とSS結合形成との共役度合を反映する、ネイテゥヴならびに変性溶液条件下での実効濃度の比は、SS1が最高で、SS4は最低であった。SS1形成蛋白の立体構造は、2次構造を持つが3次構造はない。ヒトαラクトアルブミンで報告されたようなSS2の実効濃度比の異常に高い値は、ニワトリリゾチームでは見られない。2.SS結合形成のキネティクス解析の基礎となる、1SS体4種についてのグルタチオンとの混合ジスルフォド体、各3種、の分離・同定を、逆相液体クトマトグラフィにて実現した。SS3の結合形成は遅く、それは混合ジスルフィド体の片方が形成されにくいためである。3.2SS体6種の酸化的再生反応において、ネイティヴSS結合2本の形成には、グリセロールの添加が有効であった。一方、ヘリックス構造を安定化するトリフルオロエタノールの添加は、却って、ネイティブSS結合の形成を阻害した。すなわち、2次構造の安定化機構と3次構造のそれは明白に異なる。4.2SS体のうちSS1とSS2を持つものは、オ-センティックなリゾチームと同程度の2次構造・3次構造・溶菌酵素活性を有する一方、SS3とSS4を持つものは少し2次構造と、ごくわずかの3次構造・溶菌酵素活性を有するにすぎなかった。これは、どちらに相当する変異体もモルトン・グロビュールであると報告されているヒトαラクトアルブミンの場合と大きく異なり、最終構造が酷似していても、蛋白質内部での局所あるいは非局所相互作用は異なることを示す。

1. The concentration of Cys residue in SS binding system was determined among 4 kinds of SS. Under the condition of solution, the concentration of SS3 is higher than that of SS1. The ratio of protein three-dimensional structure formation and SS binding formation to the actual concentration in different solution conditions is the highest for SS1 and the lowest for SS4. SS1 formed protein three-dimensional structure, secondary structure, and tertiary structure. The concentration ratio of SS2 is abnormally high, and the concentration ratio of SS2 is abnormally high. 2. The basic analysis of SS combination formation, 1SS body, 4 kinds of separation, 3 kinds of mixture, 3 kinds of separation, isostatic and reverse phase liquid SS3 is formed by mixing the two layers of the film. 3.2 SS 6 kinds of acid regeneration reaction, production, SS 2 kinds of formation, production, addition The formation of SS is prevented by the addition of a stable structure. The stabilization mechanism of the second order structure and the third order structure are different. 4.2 SS1 and SS2 have the same degree of secondary structure, tertiary structure and lysozyme activity, SS3 and SS4 have the same degree of secondary structure, tertiary structure and lysozyme activity. This is an example of how the final structure resembles that of a protein, and how non-local interactions occur within the protein.