リゾチームのフォールディングにおける各SS結合の役割

每个 SS 键在溶菌酶折叠中的作用

• 批准号: 08272219
• 负责人: 橘 秀樹
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08272219/
• 关键词: 蛋白質; リゾチーム; フォールディング; ジスルフィド結合

1.ニワトリリゾチームの1SS体の4種を用い、各SS結合に関わるCys残基の実効濃度を決定した。ネイティブ溶液条件下での実効濃度はSS3が一番高く、SS1が一番低い。蛋白質の立体構造形成とSS結合形成との共役度合を反映する、ネイテゥヴならびに変性溶液条件下での実効濃度の比は、SS1が最高で、SS4は最低であった。SS1形成蛋白の立体構造は、2次構造を持つが3次構造はない。ヒトαラクトアルブミンで報告されたようなSS2の実効濃度比の異常に高い値は、ニワトリリゾチームでは見られない。2.SS結合形成のキネティクス解析の基礎となる、1SS体4種についてのグルタチオンとの混合ジスルフォド体、各3種、の分離・同定を、逆相液体クトマトグラフィにて実現した。SS3の結合形成は遅く、それは混合ジスルフィド体の片方が形成されにくいためである。3.2SS体6種の酸化的再生反応において、ネイティヴSS結合2本の形成には、グリセロールの添加が有効であった。一方、ヘリックス構造を安定化するトリフルオロエタノールの添加は、却って、ネイティブSS結合の形成を阻害した。すなわち、2次構造の安定化機構と3次構造のそれは明白に異なる。4.2SS体のうちSS1とSS2を持つものは、オ-センティックなリゾチームと同程度の2次構造・3次構造・溶菌酵素活性を有する一方、SS3とSS4を持つものは少し2次構造と、ごくわずかの3次構造・溶菌酵素活性を有するにすぎなかった。これは、どちらに相当する変異体もモルトン・グロビュールであると報告されているヒトαラクトアルブミンの場合と大きく異なり、最終構造が酷似していても、蛋白質内部での局所あるいは非局所相互作用は異なることを示す。

1. Youdaoplaceholder0, ム, <s:1>, four kinds of を of 1SS bodies <e:1> are determined by を and the effective concentration of each SS-bound に related わるCys residue <e:1> を. Under the condition of ネ ティブ ティブ solution, the で <s:1> effective concentration <e:1> SS3が is high く and SS1が is low く. Protein の three-dimensional structure formation と SS form と の degrees in total service を reflect す る, ネ イ テ ゥ ヴ な ら び に - sex solution under the condition of で の be sharper concentration の than は, SS1 が highest で, SS4 は minimum で あ っ た. SS1 forms a protein with a <s:1> three-dimensional structure, a secondary structure を, a が が, and a tertiary structure な な. ヒ ト alpha ラ ク ト ア ル ブ ミ ン で report さ れ た よ う な SS2 の be sharper concentration higher than の abnormal に い numerical は, ニ ワ ト リ リ ゾ チ ー ム で は see ら れ な い. 2. SS form の キ ネ テ ィ ク ス based と の な る, 1 SS four に つ い て の グ ル タ チ オ ン と の mixed ジ ス ル フ ォ ド body, all three, の separation, with definite を, reverse phase liquid ク ト マ ト グ ラ フ ィ に て be presently し た. SS3 pieces combine to form 遅く 遅く, それ それ mixed ジス フィド フィド body pieces が form されにく ためである ためである. 3.2 SS body 6 の acidification regeneration against 応 に お い て, ネ イ テ ィ ヴ SS combined 2 this の form に は, グ リ セ ロ ー ル の add が have sharper で あ っ た. Side, ヘ リ ッ ク を ス structure stabilization す る ト リ フ ル オ ロ エ タ ノ ー ル の add は, but っ て, ネ イ テ ィ ブ SS combined の form を resistance against し た. Youdaoplaceholder0, secondary structure, <s:1> stabilizing mechanism と, tertiary structure, <s:1> それ,, understand the に difference, なる. 4.2 SS body の う ち SS1 と SS2 を hold つ も の は, オ セ ン テ ィ ッ ク な リ ゾ チ ー ム と の 2 times the same extent structure, three tectonic, bacteriolysis enzyme activity を す る side, SS3 と SS4 を hold つ も の は し two tectonic と, less ご く わ ず か の three tectonic を bacteriolysis enzyme activity, has す る に す ぎ な か っ た. こ れ は, ど ち ら に quite す る - variant も モ ル ト ン · グ ロ ビ ュ ー ル で あ る と report さ れ て い る ヒ ト alpha ラ ク ト ア ル ブ ミ ン の big occasions と き く different な が り, final structure resembles し て い て も, protein internal で の bureau あ る い は the bureau は interaction between different な る こ と を す.

项目成果

橘秀樹: "蛋白質のmixed disulfide体の定量的な作製について" 生物物理. 36S. 134-134 (1996)

Hideki Tachibana：“蛋白质混合二硫键形式的定量制备”生物物理学 134-134 (1996)。

Oka,T.: "Glycerol Specitically Assists the Formation of Native Disulfide Bonds in a Hem Lysozyme Two-Disulfide Dervative" The Third Work Shop on Principles of Protein Architecture. 44-44 (1996)

Oka,T.：“甘油特别有助于 Hem 溶菌酶二硫键衍生物中天然二硫键的形成”第三次蛋白质结构原理研讨会。

岡隆史: "リゾチーム2SS体でのα-、β-ドメイン内SS結合の役割" 生物物理. 36S. 141-141 (1996)

Takashi Oka：“溶菌酶 2SS 形式中 SS 结合的作用”生物物理学 141-141 (1996)。

橘秀樹: "逆相HPLCを用いた蛋白質SS異性体の分離" 生物物理. (印刷中). (1997)

Hideki Tachibana：“使用反相 HPLC 分离蛋白质 SS 异构体”生物物理学（1997 年）。

太田朋槻: "リゾチームの各SS結合のチオール・ジスルフィド平衡" 生物物理. 36S. 66-66 (1996)

Tomotsuki Ota：“溶菌酶中每个 SS 键的硫醇-二硫键平衡”，生物物理学 36S 66-66（1996）。