アンジオテンシンIIリセプターの単離とcDNAクローニングによる構造決定

通过 cDNA 克隆分离血管紧张素 II 受体并确定结构

• 批准号: 62222005
• 负责人: 広瀬 茂久
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62222005/
• 关键词: アンジオテンシンII; レセプター; 心房性ナトリウム利尿ホルモン; 血圧; 内皮細胞; レセプター抗体; Radiation Inactivation

アンジオテンシンIIレセプターに関する私たちのこれまでの仕事を発展させると共に, アンジオテンシンIIとは全く逆の働きをする心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)レセプターの性質と構造をも明らかにすることを目指して研究を進め以下の成果を得た. (1)アンジオテンシンII(AII)レセプターのTarget Size分析:ウシ副腎皮質から調製した膜画分をアンプルに入れて凍結乾燥した後, 真空下で封入し, 照射用の試料とした. 放射線の照射量とレセプター活性の失活の度合いより, AIIレセプターのサイズは約140kDaと推定された. 先にアフィニティーラベリングによって求めた値と大まかに一致しているが, G蛋白質とレセプターの複合体を一つの活性単位としてとらえきいる可能性もあり, 今後さらに詳細に検討する必要がある. (2)ANPレセプターの精製と性質:ウシ肺から精製したANPレセプターの構造を電気泳動により解析したところ, ANPレセプターは70kDaのサブユニット2個がジスルフィド結合でつながった140kDaの糖蛋白質であることがわえった. また, NH_2末端のアミノ酸配列を決定したところ1種類の配列しか現れなかったことより, ANPレセプターはホモダイマー構造を有することが示唆された. 精製標品をCNBrで処理しフラグメント化した後, 気相シークエンサーでアミノ酸配列を決定したところ, 5個のフラグメントについて部分シークエンスを決定ひることができた. この情報に基づいてオリゴDNAプローブを作製し, cDNAをクローニングし塩基配列を決定中である. (3)抗体の作製と利用:ANPレセプターに対する抗体を作製した. 培養した血管内皮細胞をあらかじめこの抗体で処理しておくと, ANPに対する応答が消失することより, 私たちが作製した抗体はANPの関与する情報伝達系の解析に有用であることがわかった. また, この抗体を用いて免疫組織化学的にレセプターの局在部位を同定することに成功した.

The research on the properties and structures of ANP has been carried out and the following results have been obtained. (1)Target Size Analysis: The kidney cortex was frozen and dried, then sealed under vacuum, and the sample for irradiation was analyzed. The radiation exposure and the inactivation of AII were estimated to be about 140kDa. First of all, the possibility of activity unit of G protein complex is discussed in detail in the future. (2) Purification and properties of ANP: ANP 70kDa glycoprotein, ANP 70kDa glycoprotein. NH_2 terminal acid alignment determination, ANP terminal acid alignment determination, ANP terminal acid alignment determination. After CNBr treatment of refined standard products, the phase of the product is determined by the acid arrangement, and the five parts of the product are determined by the acid arrangement. This information can be used to determine the sequence of DNA fragments, cDNA fragments, and DNA sequences. (3)Antibody production and utilization:ANP production Cultured vascular endothelial cells are useful in the analysis of ANP related information. The antibody was successfully identified by immunohistochemistry.

项目成果

M.Shimonaka: Am.J.Physiol.253. F1058-1062 (1987)

M.Shimonaka：Am.J.Physiol.253。