Bacterial 2,4-dioxygenases: Catalytic mechanism of 2,4-dioxygenolytic ring cleavage

1H-3-羟基-4-氧代喹啉-2，4-双加氧酶（Qdo）、1H-3-羟基-4-氧代喹啉-2，4-双加氧酶（Hod）和真核生物黄酮醇-2，4-双加氧酶（F24 D）对N-bzw的分解有催化作用.柯伦单氧化物的O-杂合酶。一个原核F24 D是不合适的。Qdo and Hod werten weder an Metallzentrum noch einen organischen Cofaktor. Die von den Strukturgenen qdo und hod abgeleiteten Aminosäuresquenzen keigen Homologie zu bekannten Oxygenasen，sondern besitzen zwar geringe，aber signifikante Ähnlichkeit zu Enzymen des alpha/beta-Hydrolase-Faltungstyps.由于丝氨酸-水解酶催化剂的丝氨酸-组氨酸三联体的丝氨酸- (i)Die für Substratbindung und Katalyanten Aminosäurereste der Qdo und Hod sollen identifiziert韦尔登（gerichtete Mutagenese; chemische Derivatisierungen; Substrat-trapping）;（ii）es soll versucht韦尔登，Hod und evtl. Qdo zu kristallisieren（für Röntgenstrukturanalysen）;（iii）eine prokaryontische F24D soll gereinigt und mit Qdo und Hod bzw.真核生物F24 Ds verglichen韦尔登。Ziel是酶解2，4-二氧合酶的分解机理的研究。与B教授合作研究了Qdo和Hod的结晶。Dijkstra，Groningen.

Die bakteriellen Enzyme 1H-3-Hydroxy-4-oxochinolin-2,4-Dioxygenase (Qdo) und 1H-3-Hydroxy-4-oxochinaldin-2,4-Dioxygenase (Hod) und die eukaryontische Flavonol-2,4-Dioxygenase (F24D) katalysieren die Spaltung von N- bzw. O-Heterozyklen unter Freisetzung von Kohlenmonoxid. Eine prokaryontische F24D ist bisher nicht beschrieben. Qdo und Hod enthalten weder ein Metallzentrum noch einen organischen Cofaktor. Die von den Strukturgenen qdo und hod abgeleiteten Aminosäuresequenzen zeigen keinerlei Homologie zu bekannten Oxygenasen, sondern besitzen zwar geringe, aber signifikante Ähnlichkeit zu Enzymen des alpha/beta-Hydrolase-Faltungstyps. Eigene Arbeiten deuten darauf hin, daß Qdo katalytisch relevante Ser- und His-Reste besitzt, die den Ser- und His-Resten der katalytischen Triade der Serin-Hydrolasen entsprechen, so daß Qdo nicht nur strukturell, sondern auch funktionell mit Proteinen des alpha/beta-Hydrolase-Faltungstyps verwandt zu sein scheint.(i) Die für Substratbindung und Katalyse relevanten Aminosäurereste der Qdo und Hod sollen identifiziert werden (gerichtete Mutagenese; chemische Derivatisierungen; Substrat-trapping); (ii) es soll versucht werden, Hod und evtl. Qdo zu kristallisieren (für Röntgenstrukturanalysen); (iii) eine prokaryontische F24D soll gereinigt und mit Qdo und Hod bzw. eukaryontischen F24Ds verglichen werden. Das Ziel ist die Aufklärung des Katalysemechanismus der enzymatischen 2,4-Dioxygenolyse.Versuche zur Kristallisation von Qdo und Hod erfolgen in Kooperation mit Prof. B. Dijkstra, Groningen.