Expression and mutagenesis of genes coding for molybdenum hydroxylases from bacteria. Characterization of catabolic plasmids (quinaldine degradation)

(1) Die Isochinolin-1-oxidoreduktase (Ior)， ein异二聚体钼- eisen / schwefeld - protein mit钼- cytosin -二核苷酸- coftor， unterscheidet siich von anderen molybdänhaltigen Hydroxylasen des n- heteroaromatenabus durch eine abweichende Anordnung von "Domänen", [2Fe2S]-Zentren mit sehr hohen reduktionspotenalen sowie einem außergewöhnlichen kinetischen Verhalten bei der reduktase Molybdänzentrums。Zum Verständnis . der催化剂的结构、生产和特性研究[j]。大足菌zunächst in System zur function基因的表达。荷兰gerichtete ortsspezifische Mutagenese and Analyse der proteinvariante sollen dann catalalytisch related Aminosäurereste der der or and des moldoeisen / schwefell - flavoproteins - Chinolin-2-oxidoreduktase （Qor）的鉴定[j]。（二）模具Fähigkeit， china aldin zu oxiden bzw。abzubauen, scheint bei sechs china . verwertenden Bakterienstämmen auf einem . 100 kb生长ßen质粒codiert zu sein；die meisten dieser Stämme enthalten mindestens in zusätzliches质粒。Die Charakterisierung diesesneen chinaldinabbaus - plasmids ist in weiteres Ziel des Vorhabens， he ßerdem soll as降解Potential der Bakterienstämme (Abbau verschiedener "Xenobiotika") and Die Rolle der weiteren质粒in katabolen stoffwehselprozessen untersucht werden。

(I) Die Isochinolin-1-oxidoreduktase (Ior), ein heterodimeres Molybdo-Eisen/Schwefel-Protein mit Molybdopterin-Cytosin-Dinucleotid-Cofaktor, unterscheidet sich von anderen molybdänhaltigen Hydroxylasen des N-Heteroaromatenabbaus durch eine abweichende Anordnung von "Domänen", [2Fe2S]-Zentren mit sehr hohen Reduktionspotentialen sowie einem außergewöhnlichen kinetischen Verhalten bei der Reduktion des Molybdänzentrums. Zum Verständnis der Katalyse der Ior sind Konstruktion, Produktion und Charakterisierung von Proteinvarianten von besonderem Interesse. Dazu muss zunächst ein System zur funktionellen Expression der Gene der Ior etabliert werden. Durch gerichtete ortsspezifische Mutagenese und Analyse der Proteinvarianten sollen dann katalytisch relevante Aminosäurereste der Ior und des MolybdoEisen/Schwefel-Flavoproteins Chinolin-2-oxidoreduktase (Qor) identifiziert werden. (II) Die Fähigkeit, Chinaldin zu oxidieren bzw. abzubauen, scheint bei sechs Chinaldin verwertenden Bakterienstämmen auf einem ca. 100 kb großen Plasmid codiert zu sein; die meisten dieser Stämme enthalten mindestens ein zusätzliches Plasmid. Die Charakterisierung dieses neuen Chinaldinabbau-Plasmids ist ein weiteres Ziel des Vorhabens, außerdem soll das degradative Potential der Bakterienstämme (Abbau verschiedener "Xenobiotika") und die Rolle der weiteren Plasmide in katabolen Stoffwechselprozessen untersucht werden.