Das Proteom der Chinolindegradation bei Pseudomonas putida 86.

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Pseudomonas putida 86 verwertet Chinolin als einzige C- und Energiequelle. Die Chinolin-2-Oxidoreduktase (Qor), ein Enzym der Xanthinoxidase-Familie mit Molybdän-Pyranopterin-Cytosin-Dinucleotid-Cofaktor (Mo-MCD) und weiteren Redoxzentren, leitet den Abbau ein. Der Stamm enthält auch eine Xanthin-Dehydrogenase (XDH) mit Molybdän-Pyranopterin-Cofaktor (Mo-MPT). Die Sequenz der qor-Gene und flankierender Bereiche ist bekannt (17 kb). Es soll untersucht werden, welche der postulierten Gene dieser Bereiche der Induktion der Transkription durch Chinolin unterliegen. Durch Insertionsmutagenese von Genen des Genclusters soll geprüft werden, welche Genprodukte am Abbauweg und am "assembly" funktioneller Qor und/oder XDH beteiligt sind. Ein hypothetisches Gen "mocA" codiert möglicherweise die (bisher nicht nachgewiesene) Mo-MCD-Synthase, die die Umsetzung von Mo-MPT zu Mo-MCD katalysiert. Es soll geprüft werden, ob die heterologe Co-Expression von "mocA" und Strukturgenen einer Mo-haltigen Hydroxylase die Synthese funktionellen Mo-MCD-haltigen Enzyms erlaubt. Das Proteom Chinolin-induzierter Zellen von P. putida 86 soll mittels 2D-Elektrophorese analysiert werden; die NH2-Termini ausgewählter Proteine werden bestimmt, um daraus Oligonucleotid-Sonden abzuleiten. Die Gene dieser Proteine sollen kloniert und sequenziert werden. Ziel ist die Erfassung von Genen/Enzymen der Chinolindegradation, um ein Verständnis des Abbauweges zu erarbeiten.