Charakterisierung, funktionelle Expression und Mutagenese der Gene bakterieller Molybdän-haltiger Hydroxylasen

点击翻译按钮获取中文摘要

Das Vorhaben befaßt sich mit der vergleichenden Charakterisierung der bakteriellen Molybdänhaltigen Hydroxylasen chinolin-2oxidoreduktase (Qor), Isochinolin-1-oxidoreduktase (Ior) und Chinaldin-4-oxidase (Qox). Die Gene der Qox sollen charakterisiert werden. Es soll versucht werden, ein System zur regulierten, funktionellen Expression der Gene bakterieller Molybdän-haltiger Hydroxylasen zu entwicklen. Bei erfolgreicher Expressionsklonierung soll ein Glutamatrest der Qor und Ior mit vermuteter katalytischer Bedeutung durch gerichtete ortsspezifsche Mutagenese ausgetauscht werden. Durch kinetische und spektroskopische Charakterisierung der aus Expressionsklonen isolierten Proteinvarianten soll die katalytische Rolle dieses Glutamatrestes untersucht werden. Die zelluläre Lokalisation der Ior, deren Sequenz einen mutmaßlichen Leader-Bereich aufweist, soll immuncytochemisch nachgewiesen werden. Durch Transposon-Mutagenese sollen Mutanten von P. putida 86 erzeugt werden, um in zukünftigen Arbeiten die Identifizierung und Charakterisierung akzessorischer Gene der Chinolinhydroxylierung zu ermöglichen. In Zusammenarbeit mit Prof. Hüttermann (Homburg) werden die Molybdän- und Eisen-Schwefel-Zentren der Molybdänhaltigen Hydroxylasen vergleichend charakterisiert; in Zusammenarbeit mit Prof. Huber (Marinsried) wird die Qor kristallisiert, um Röntgenstrukturanalysen zu ermöglichen.