Molekulare und biochemische Charakterisierung der Alginat-Polymerase aus Pseudomonas aeruginosa

通过对铜绿假单胞菌的鉴定、遗传学和分子特性研究，探讨了海藻酸盐聚合酶的前体，即海藻酸盐生物合成酶。Zunächst soll ein empfindliches Enzymassay für die Alginat-Polymerase entwickelt韦尔登，welches die Reinigung des nativen Enzyms ermöglichen soll.酶的生物化学和酶学特性是韦尔登的。通过藻酸盐生物合成基因簇的鉴定，获得了藻酸盐聚合酶基因（alg 8，alg 44，algK，algX）。大肠杆菌中的这种基因sollen，铜绿假单胞菌的假单胞菌和等基因藻酸盐阴性突变体，没有藻酸盐，功能性强韦尔登。因此，对基因产物功能的认识，必须对海藻酸盐聚合酶进行必要的研究，并对酶的活性进行强化。因此，我们需要对铜绿假单胞菌突变体产生的天然藻酸盐聚合酶进行重组，并对其进行进一步鉴定。通过体外合成确定的藻酸盐聚合酶和筛选具有抑制作用的藻酸盐聚合酶，可以确定生物膜的开发。韦尔登生物合成的功能有待于不同生物膜的评价。藻酸盐-生物合成的异质性表达可使生物合成定义为藻酸盐，即生物相容性材料，可用于各种韦尔登，但韦尔登。

Im Rahmen des Vorhabens soll die Alginat-Polymerase, das Schlüsselenzym der Alginat-Biosynthese, aus Pseudomonas aeruginosa identifiziert, gereinigt und molekular charakterisiert werden. Zunächst soll ein empfindliches Enzymassay für die Alginat-Polymerase entwickelt werden, welches die Reinigung des nativen Enzyms ermöglichen soll. Das gereinigte Enzym soll biochemisch und enzymologisch charakterisiert werden. Es wurden bereits Gene (alg8, alg44, algK, algX) im Alginat-BiosyntheseGen-Cluster identifiziert, deren Genprodukte vermutlich die Alginat-Polymerase in der Cytoplasmamembran rekonstituieren. Diese Gene sollen in Escherichia coli, Pseudomonaden und isogenen Alginat-negativen Mutanten von P. aeruginosa, die kein Alginat bilden, funktionell exprimiert werden. Dies soll sowohl Hinweise auf die Funktion der Genprodukte als essentielle Untereinheiten der Alginat-Polymerase liefern als auch die Reinigung dieses Enzyms erleichtern. Zusätzlich soll die Reinigung der nativen Alginat-Polymerase aus Alginat-überproduzierenden Mutanten von P. aeruginosa vorgenommen werden und die Untereinheiten identifiziert werden. Die Etablierung eines empfindlichen Enzymassays und die Verfügbarkeit gereinigter Alginat-Polymerase würde zum einen die in vitro Synthese von definierten Alginatmolekülen erlauben und zum anderen das Screening nach Inhibitoren ermöglichen, die die Entwicklung von Biofilmen verhindern würden. Die Funktion der Alginat-Biosynthese bei der Überdauerung differenzierter Biofilme soll evaluiert werden. Durch heterologe Expression von Alginat-Biosynthesegenen soll ebenso die Biosynthese definierter Alginate, die als biokompatible Materialien für vielfältige medizinische Anwendungen eingesetzt werden können, ermöglicht werden.