Molekulare und biochemische Charakterisierung der Alginat-Polymerase aus Pseudomonas aeruginosa

铜绿假单胞菌藻酸盐聚合酶的分子和生化特征

• 批准号: 5386205
• 负责人: Professorin Dr. Susanne Fetzner
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Molekulare Mikrobiologie und Biotechnologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5386205?language=en
• 关键词: Molekulare; und; biochemische; Charakterisierung; der

Im Rahmen des Vorhabens soll die Alginat-Polymerase, das Schlüsselenzym der Alginat-Biosynthese, aus Pseudomonas aeruginosa identifiziert, gereinigt und molekular charakterisiert werden. Zunächst soll ein empfindliches Enzymassay für die Alginat-Polymerase entwickelt werden, welches die Reinigung des nativen Enzyms ermöglichen soll. Das gereinigte Enzym soll biochemisch und enzymologisch charakterisiert werden. Es wurden bereits Gene (alg8, alg44, algK, algX) im Alginat-BiosyntheseGen-Cluster identifiziert, deren Genprodukte vermutlich die Alginat-Polymerase in der Cytoplasmamembran rekonstituieren. Diese Gene sollen in Escherichia coli, Pseudomonaden und isogenen Alginat-negativen Mutanten von P. aeruginosa, die kein Alginat bilden, funktionell exprimiert werden. Dies soll sowohl Hinweise auf die Funktion der Genprodukte als essentielle Untereinheiten der Alginat-Polymerase liefern als auch die Reinigung dieses Enzyms erleichtern. Zusätzlich soll die Reinigung der nativen Alginat-Polymerase aus Alginat-überproduzierenden Mutanten von P. aeruginosa vorgenommen werden und die Untereinheiten identifiziert werden. Die Etablierung eines empfindlichen Enzymassays und die Verfügbarkeit gereinigter Alginat-Polymerase würde zum einen die in vitro Synthese von definierten Alginatmolekülen erlauben und zum anderen das Screening nach Inhibitoren ermöglichen, die die Entwicklung von Biofilmen verhindern würden. Die Funktion der Alginat-Biosynthese bei der Überdauerung differenzierter Biofilme soll evaluiert werden. Durch heterologe Expression von Alginat-Biosynthesegenen soll ebenso die Biosynthese definierter Alginate, die als biokompatible Materialien für vielfältige medizinische Anwendungen eingesetzt werden können, ermöglicht werden.

Im Rahmen des Vorhabens soll die Alginat-Polymerase、das Schlüsselenzym der Alginat-Biosynthese、aus 铜绿假单胞菌鉴定、gereinigt 和分子特征。 Zunächst soll ein empfindliches Enzymassay für die nat-Polymerase entwickelt werden, weches die Reinigung des nativen Enzyms ermöglichen soll.酶是生物化学和酶学的基本特征。这些基因（alg8、alg44、algK、algX）是藻类生物合成基因簇鉴定的，是藻类细胞质膜重组中藻类聚合酶的基因产品。大肠杆菌、假单胞菌和铜绿假单胞菌阴性的藻类基因突变体中的基因Sollen，是藻类的基因，具有初步的功能。因此，本产品的功能是海藻酸钠聚合酶的重要组成部分，也是酶的再生剂。它是天然藻类聚合酶的再生，是藻类生产过程中的铜绿假单胞菌变异和非特异识别的方法。酶制剂的建立和生产过程中海藻聚合酶的体外合成、定义海藻分子的合成和筛选以及抑制剂的筛选、生物膜的研究 上维尔登。海藻生物合成的功能与生物膜的不同之处在于我们可以对其进行评估。海藻酸盐-生物合成的异源表达是生物合成的定义，海藻酸盐是生物相容性材料，是一种生物相容性材料。