Molekulare und biochemische Charakterisierung der Alginat-Polymerase aus Pseudomonas aeruginosa

铜绿假单胞菌藻酸盐聚合酶的分子和生化特征

• 批准号: 5386205
• 负责人: Professorin Dr. Susanne Fetzner
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Molekulare Mikrobiologie und Biotechnologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2001-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5386205?language=en
• 关键词: Molekulare; und; biochemische; Charakterisierung; der

Im Rahmen des Vorhabens soll die Alginat-Polymerase, das Schlüsselenzym der Alginat-Biosynthese, aus Pseudomonas aeruginosa identifiziert, gereinigt und molekular charakterisiert werden. Zunächst soll ein empfindliches Enzymassay für die Alginat-Polymerase entwickelt werden, welches die Reinigung des nativen Enzyms ermöglichen soll. Das gereinigte Enzym soll biochemisch und enzymologisch charakterisiert werden. Es wurden bereits Gene (alg8, alg44, algK, algX) im Alginat-BiosyntheseGen-Cluster identifiziert, deren Genprodukte vermutlich die Alginat-Polymerase in der Cytoplasmamembran rekonstituieren. Diese Gene sollen in Escherichia coli, Pseudomonaden und isogenen Alginat-negativen Mutanten von P. aeruginosa, die kein Alginat bilden, funktionell exprimiert werden. Dies soll sowohl Hinweise auf die Funktion der Genprodukte als essentielle Untereinheiten der Alginat-Polymerase liefern als auch die Reinigung dieses Enzyms erleichtern. Zusätzlich soll die Reinigung der nativen Alginat-Polymerase aus Alginat-überproduzierenden Mutanten von P. aeruginosa vorgenommen werden und die Untereinheiten identifiziert werden. Die Etablierung eines empfindlichen Enzymassays und die Verfügbarkeit gereinigter Alginat-Polymerase würde zum einen die in vitro Synthese von definierten Alginatmolekülen erlauben und zum anderen das Screening nach Inhibitoren ermöglichen, die die Entwicklung von Biofilmen verhindern würden. Die Funktion der Alginat-Biosynthese bei der Überdauerung differenzierter Biofilme soll evaluiert werden. Durch heterologe Expression von Alginat-Biosynthesegenen soll ebenso die Biosynthese definierter Alginate, die als biokompatible Materialien für vielfältige medizinische Anwendungen eingesetzt werden können, ermöglicht werden.

我是Rahman des Vorhabens soll die alginat-Polymerase，das Schlüsselmem der alginat-BiSynthes，Aus Pseudomonas铜绿假单胞菌鉴定，Gereinigt和分子特征。Zunächst soll ein empfindlicches Enzymtest für die alginat-Polymerase entwickelt wickelt，well des Reinigung des nativen Enzyms ermöglichen soll.进行了Gereinigte Soll生化和酶学特性研究。Es Wurden bereits基因(alg8，alg44，algK，algX)在藻类生物合成基因簇中鉴定，在细胞质膜上形成藻类聚合酶。Dese基因Sollen在大肠埃希菌、假单胞菌和同源藻毒素阴性的铜绿假单胞菌、枯草杆菌藻毒素、Funktionell expriert中被发现。海藻多聚合酶的基本功能和酶的作用。对藻类聚合酶Aus alginat-überproduzierenden Mutanten von P.铜绿假单胞菌基因进行了鉴定。在体外合成这些定义的藻酸酶、藻酸酶和藻酸酶，以筛选抑制细菌的细菌。对藻类-生物合成的作用和不同的生物膜进行了评价。通过异源表达和生物合成，生物合成了这些定义的海藻酸盐，以及生物相容的材料。