差螢光ラベリング法によるミオシン頭部の三つのドメインの構造変化の検出

差异荧光标记法检测肌球蛋白头部三个结构域的结构变化

• 批准号: 63580110
• 负责人: 平塚 寿章
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580110/
• 关键词: 螢光ラベリング; ミオシン頭部の構造変化; ミオシンATPアーゼ

筋収縮に関与するタンパク質であるミオシンは一方の端に球状の頭部をもつ棒状分子である。筋収縮時のエネルギー源となるアデノシン-5′-三リン酸(ATP)が結合して分解される部位や、ミオシンのパートナーとなるタンパク質アクチンを結合する部位はミオシン頭部に存在する。現在ミオシンは、20K、50K、26Kと呼ばれる三つの"ドメイン"に分けて研究されている。筋収縮のメカニズムを考える上で、これら三つのドメイン間の相互作用がどの様にしてミオシン頭部の機能に関連しているかが、当面最も重点的に研究されなければならない。ミオシン頭部の三つのドメインを差螢光ラベリング法により特異的にラベルして、結合している蛍光ラベルのスペクトル変化から各々のドメインで起きる構造変化を検出することはこのような研究に不可欠な実験である。ウサギ骨格筋ミオシンからその頭部(S-1)をキモトリプシン消化により調製し、これにセリン残基と特異的に反応する螢光試薬である9-アントロイルニトリル(ANN)を作用させた。この反応でS-1重鎖が特異的に標識されたが、この標識はATPまたはADP存在下でしか起きなかった。標識S-1について調べたところ、26Kドメインにある1モルのセリン残基に螢光試薬が結合していた。この標識によりS-1のATP加水分解活性は70%も減少した。一方、ミオシンに特異的に結合することがわかっている阻害剤ペプチドを沖縄産の海綿より抽出して、これをS-1に加えてANNを作用させると26Kドメインの標識のされ方は減少した。以上の結果から、ミオシン分子頭部にATPやADPが結合すると26Kドメインに構造変化が起きて1モルのセリン残基の反応性が高くなること、海綿由来の阻害剤ペプチドはこのセリン残基の付近に結合することが明らかになった。

There is a ball in the end and a rod in the end of one side. During the period of tendon, there is a gap in the part of the compound that is used to decompose the tissue in combination with ATP, which is used to decompose the part of the body. Now, at 20K, 50K and 26K, we are talking about three times as much as possible. This is the most important part of the study, which is the most important part of the research. In the third part of the department, in order to improve the quality of the system, in the first place, in the first place, in the third part of the department, in order to improve the quality of the system, the three parts of the department do not need to know how to improve the quality of the system. The bones and tendons, the bones, the bones In the presence of ADP, you need to know more about your identity, ATP, and ADP. The tag Smur1