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末梢リンパ血におけるT細胞再配列遺伝子の多様性と腫瘍拒絶との関連

外周淋巴血中T细胞重排基因的多样性及其与肿瘤排斥的关系

基本信息

批准号：
01015047
负责人：
山岸秀夫
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.成熟ヌードマウス脾臓細胞より染色体外の環状DNAを精製しDNAクローンライブラリーを作成しTCRgamma鎖とdelta鎖の再構成産物の解析を行った。1)gamma鎖については、正常脾臓と同様gamma_1、gamma_2両鎖が利用され、しかもシグナル結合にN配列の挿入もみられた。2)delta鎖については生殖細胞型D_2ーJ_1と擬転写結合D_1ーD_2が認められ、正常のシグナル結合はみられなかった。delta鎖は単純に逆位機構のみで再構成するとの知見に一致する。2.成熟正常マウス脾臓細胞のgamma鎖delta鎖再構成ではシグナル結合に塩基欠損のみられるものもあり、はげしい組換え反応の結果として予想外の多様性を示した。胸腺外分化の寄与は少いと考えられる。3.フレンドウィルスで誘発された腫瘍を拒絶した同系マウスの末梢リンパ血における腫瘍特異的CTLの遺伝子構造の解析を行った。1)20数匹の担癌マウスを用いて、その脾臓細胞を同系腫瘍細胞の存在下で培養し、腫瘍特異的CTLを増殖させたのち、TCRJbeta遺伝子をプローブとしてサザン解析したところ、再構成パターンは10以下の限定されたものであった。2)腫瘍特異的CTLクローンNO.8に対する同系マウスモノクローナル抗体N9ー127をとり,数百個のCTLクローンをしらべたところ,その10%が陽性を示した。そのTCRalpha鎖とbeta鎖の遺伝子構成をしらべると、Valpha_1Jalpha_<112ー2>/Vbeta_<10>Dbeta_<2.1>Jbeta_<2.7>であった。3)N9ー127抗体によるCTL活性の阻害効果の違いによってCTLクローンはほぼ2群に分けられた。alpha鎖については結合部も含めて同一のアミノ酸配列を示したが,beta鎖のCDR3に対応するD/J結合部ではG/yとAspの二種類にわかれた。今後D/J結合部に焦点をあてて他のCTLクローンの解析をすすめ,腫瘍特異的イデイオタイプの実体を明らかにする。

1. Analysis of the reconstructed products of TCR gamma lock and delta lock by purification of extra-chromosomal circular DNA from mature spleen cells 1)Gamma lock is used in combination with gamma_1 and gamma_2 lock. 2)delta lock Delta lock is a pure reverse mechanism that reconstructs knowledge. 2. The gamma lock of mature normal spleen cells is reconstructed to show the diversity of the cells. The differentiation of thymus gland is different from that of other organs. 3. The analysis of CTL gene structure in the host cells of the host cells. 1)20 Several tumor-bearing cells were cultured in the presence of syngeneic tumor-bearing cells, and tumor-specific CTL were cultured in the presence of syngeneic tumor-bearing cells. 2)The tumor-specific CTL clone NO.8 was found to be positive for 10% of the hundreds of CTL clones identified by N9 - 127. TCR alpha lock and beta lock are composed of elements such as Valpha_1Jalpha_<112 - 2>/Vbeta_<10>Dbeta_<2.1>Jbeta<2.7>_ 3)N9 - 127 antibody to CTL activity inhibition effect in the middle of the study, CTL response to group 2 was detected. alpha lock,beta lock, CDR3, D/J, G/Y, Asp In the future, the D/J junction will focus on the analysis of other CTL components, and the selection of specific components will be made clear.