腫瘍抗原特異的T細胞抗原レセプタ-の構造解析

肿瘤抗原特异性T细胞抗原受体的结构分析

• 批准号: 02262219
• 负责人: 山岸 秀夫
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262219/
• 关键词: FBLー3腫瘍細胞; CTLクロ-ン; MLTC培養; 單クロ-ン抗体法; Vα_1; Vβ_<10>組合せ; DβーJβ結合部; サザン解析法; FACS解析法

移植されたFBLー3腫瘍を排除した同系マウスの脾細胞をインタ-ロイキンILー2と不活化した腫瘍細胞抗原の存在下でMLTC培養を行い腫瘍抗原特異的T細胞を増殖させた後,次の3つの方法を用いてT細胞クロ-ンを選択し、TCRの構造解析を試みた。(1)單クロ-ン抗体法:CTLクロ-ンNo.8に対して作製された單クロ-ン抗体N9ー127は、FBLー3特異的CTLクロ-ン総数396のうち,44の細胞傷害活性を阻害した。No.8はcDNA解析の結果,Vα_IJα_<II2ー2>CαとVβ_<10>Dβ_<2,1>Jβ_<2,7>Cβ_2からなるTCRを発現していることが明らかになった。44クロ-ンについてN9ー127抗体による細胞傷害活性阻害テストを行った結果,低濃度の抗体で阻害されるもの(No.8型)と,高濃度の抗体を要するもの(B5ー10型)とがほぼ同数存在した。塩基配列をアミノ酸配列に翻訳すると,いずれもβ鎖の1残基以外はα,β両鎖とも全く同じ配列を示した。異なるβ鎖の1残基はDβーJβ結合部CDR3に存在し、No.8型ではグリシンをB5ー10型ではアスパラギン酸を示した。(2)サザン解析法:22匹の担癌マウスよりそれぞれMLTC細胞を調整し,Jβ1,Jβ2をプロ-ブとしてサザン解析を行ったところ,MLTCー1,ー14,ー15の3種が鮮明なJβ2の再配列バンドを示した。MLTCー14由来のクロ-ンSB14ー11についてcDNA解析を行ない,発現されているTCRとしてVα11Jα2B4CαとVβ14Dβ_<2,1>Jβ_<2,1>Cβ_2を固定した。(3)FACS解析法:單一のMLTC細胞について表面抗原をFACSによって解析したところ,CD8^+92%,CD4^+6%,Vα_3^+68%,Vβ_3^+36%の結果をえた。このMLTC細胞より23種のT細胞クロ-ンを分離したところ,15種がVα_3^+であり,そのうち8種はVα_3^+Vβ_3^+であった。

After transplantation of FBL-3 tumor cells, exclusion of syngeneic TCR spleen cells, culture of MLTC in the presence of tumor cell antigen, proliferation of tumor antigen specific T cells, and analysis of TCR structure were studied. (1)Single antibody method:CTL antibody No. 8 was used to inhibit the cytotoxicity of FBL-3 specific CTL antibody N9 - 127. The total number of CTL antibodies was 396 and 44. No. 8 cDNA analysis results show that Vα_IJα_&lt;II2 - 2&gt;Cα and Vβ_<10>Dβ_&lt;2,1&gt;Jβ_&lt;2,7&gt;Cβ_2 are the most important factors influencing the development of TCR. The results showed that low concentrations of N9 - 127 antibody inhibited cell injury activity (type 8) and high concentrations of N9 - 127 antibody inhibited cell injury activity (type B5 - 10). The nucleotide sequence is identical to that of the β-residue sequence. The presence of CDR3 in the β-lock residue 1 of type 8, B5 - 10 and CDR3 in the β-lock residue 1 of type 8 is shown. (2)The analysis method of MLTC cells:22 kinds of MLTC cells were adjusted,Jβ1,Jβ2 were adjusted, and 3 kinds of MLTC cells were adjusted, J β 1, Jβ2 were adjusted. MLTC-14 was isolated from SB14 - 11 by cDNA analysis, and found that TCR-Vα11Jα2B4Cα-Vβ14Dβ_&lt;2,1&gt;Jβ_&lt;2,1&gt;Cβ_2 was fixed. (3)FACS analysis: Single MLTC cells were analyzed by FACS, CD8 ^+92%, CD4 ^+6%, V α_3^+68%, V β_3^+36%. 23 kinds of MLTC cells were isolated, 15 kinds were Vα_3^+, 8 kinds were Vα_3^+.

项目成果

山岸 秀夫: "T細胞抗原受容体" ファルマメディカ. (1991)

Hideo Yamagishi：“T 细胞抗原受体”Pharma Medica (1991)。

Toshiyasu Hirama: "Conserved V(D)J junctional segnence of crossーreactive cytotoxic F cell receptor idiotype and the ettect of a single amino arid substitution" Emopean Journal of Immunology. 21. 483-488 (1991)

Toshiyasu Hirama：“交叉反应性细胞毒性 F 细胞受体独特型的保守 V(D)J 连接序列和单个氨基和取代的影响”Emopean Journal of Nutrition 21. 483-488 (1991)。

Yuji Matsubayashi: "Paticipation of a dominant cytotoxic T cell population detined by a monoclonal antibody in syngeneic antiーtumor responses" European Journal of Immunology. 20. 2095-2103 (1990)

Yuji Matsubayashi：“同基因抗肿瘤反应中单克隆抗体决定的显性细胞毒性 T 细胞群的参与”欧洲免疫学杂志 20. 2095-2103 (1990)。

Katsuya Harada: "Lack of teedback inhibition of V_k gene rearrangement by productively reananged allels" Journal of Experimental Medicine. 173. 409-415 (1991)

Katsuya Harada：“有效重排等位基因对 V_k 基因重排缺乏抑制作用”《实验医学杂志》。

Takuji Iwasato: "Circular DNA is excised by immunoglobulin class switch recombination" Cell. 62. 143-149 (1990)

Takuji Iwasato：“通过免疫球蛋白类开关重组切除环状 DNA”细胞。