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2倍体野生種タバコプロトプラスト系における体細胞突然変異とDNA修復に関する研究

二倍体野生烟草原生质体系统体细胞突变与DNA修复研究

基本信息

批准号：
63560006
负责人：
池田滋
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63560006/
关键词：
ソマクローナル変異体細胞突然変異 DNA修復 UV損傷反復DNA 脱分化再分化

项目摘要

1.ソマクローナル変異として生じる体細胞突然変異の生成量を推定する方法として、核DNAの制限酵素分解物と反復配列DNAプローグのサザンハイブリダイゼーションパターンを母植物と再分化植物間で比較する方法を検討した。材料にはミドリアマナを用い、核DNAのHaeIII分解物から190bpの反復配列DNAをクローニングした。カルス由来再分化植物について染色体変異、水溶性タンパクの等電点電気泳動パターン、および反復配列DNAのサザンハイブリダイゼーションパターンを比較したところ、反復配列DNAハイブリダイゼーションパターンの変異は染色体やタンパクの変異とは独立に、しかもカルス誘導初期に生じたものと考えられた。今後はこの原因が高頻度の塩基配列レベルの突然変異なのか、大規模な塩基のメチル化によるのかを検討する。いずれにせよ脱分化初期のDNA変化を高感度で検出できる方法だと考えられた。2.野生種タバコの核DNAの制限酵素分解物から数種の鎖長の反復配列と思われる配列を濃縮し大腸菌にクローニングした。今後はサザンハイブリダイゼーションにより反復配列であることの確認をとり、これをプローブにしてプロトプラスト由来再分化植物について比較を行う。3.タバコの分化を終了した緑葉にUVを照射した後、光回復あるいは暗回復を行わせ、抽出したDNAをマイクロコッカスノエンドヌクレアーゼで処理しピリミジンダイマー特異的な単鎖切断を起こさせた上でアルカリアガロースゲル電気泳動を行って、ピリミジンダイマーの修復能を推定した。その結果、分化した緑葉が明らかに光回復能をもつこと、またこの方法は非常に検出感度が高いことがわかった。今後はこの方法を用いて、培養細胞との比較により細胞分化とDNA修復能の関係を詳細に検討する。

1. Methods for estimating the amount of somatic mutation produced by the mutation of DNA and for comparing the mutation of DNA between parent plants and re-differentiated plants The material is composed of 190bp DNA and 190bp DNA. The origin of the plant differentiation is chromosome differentiation, water solubility, isoelectric point electrokinetic activity, and repeated alignment of DNA. In the future, the causes of this phenomenon will be discussed from the sudden change of high-frequency base alignment to the large-scale base alignment. In the early stages of dedifferentiation, DNA transformation was highly sensitive. 2. The restriction enzyme of wild species DNA is concentrated in Escherichia coli. From now on, the plants will be re-differentiated and compared with each other. 3. After the differentiation of the buds is over, the green leaves are irradiated with UV, and the light and dark recovery are carried out. The extracted DNA is processed and processed by the Michelangelo Kakusai Enendō Kakuraiya, and the unique single-lock cutting is carried out. Today, the electric energy of the Michelangelo Kakusai is activated, and the repair ability of the Michelangelo Kakusai is estimated. The result, differentiation, green leaves, light recovery, method, and sensitivity of light recovery are high. In the future, the relationship between cell differentiation and DNA repair ability will be discussed in detail.