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酵素グリオキサラーゼIの細胞増殖制御機構とアミノ末端プロセッシングの解析

乙二醛酶 I 的细胞生长控制机制和氨基末端加工分析

基本信息

批准号：
63560105
负责人：
木村光
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

酵素グリオキサラーゼIは細胞毒であるメチルグリオキサールの解毒に関与する主要な酵素であり、微生物から高等動植物に至る様々な細胞中に存在している。本酵素の活性変動は細胞増殖と深く関連しておりその制御機構の解明は、細胞の増殖及び分裂のメカニズム解明の一助となることが予想される。本研究では微生物を用い、細胞の分裂増殖機構を解析する目的で、まず細菌Pseudomonas putidaよりグリオキサラーゼIを精製しその諸性質について検討した。本酵素は分子量19,000よりなるモノマーで、補欠分子族として1個の亜鉛イオンを含んでいた。またそのNー末端アミノ酸配列を決定したところMet-Ser-Leu-Asn-Asp-であった。次にPseudomonas putidaの染色体DNAバンクよりグリオキサラーゼI遺伝子をクローニングし、これを大腸菌Escherichia coli C600株中で発現させた。その結果、グリオキサラーゼI活性は親株の約120倍まで増大した。次にその遺伝子の全塩基配列を決定し、そこから予測されるNー末端アミノ酸配列を検討した結果、先にPseudomonas putidaより精製した酵素のNー末端アミノ酸配列と完全に一致し、該遺伝子がグリオキサラーゼIをコードすることが明らかとなった。またグリオキサラーゼI遺伝子を導入した大腸菌C600より精製した酵素のNー末端アミノ酸配列を決定した結果Ser-Leu-Asn-Asp-であり、Nー末端のメチオニンが除去されていた。これは恐らく大腸菌中のNーターミナルアミノペプチダーゼによりプロセッシングを受けたためと考えられた。Nー末端のメチオニンが除去されたグリオキサラーゼIの諸性質に就いては、野生型のそれと比べて差は認められなかった。

Enzyme is a cytotoxic enzyme The main enzymes, microorganisms, and higher animals and plants are present in the cells of higher animals and plants. The activity of this enzyme stimulates cell proliferation and is closely related to the control mechanism of the enzyme. , cell proliferation and division of the cell proliferation and division of the のメカニズム见明の一help となることがyuthink される. The purpose of this study is to analyze the use of microorganisms and the mechanism of cell division and reproduction, and to analyze the bacteria Pseudomonas PutidaよりグリオキサラーゼIをRefinedしそのvarious propertiesについて検questionした. The molecular weight of this enzyme is 19,000 よりなるモノマーで, and the molecular family として1 is a んでいた.またそのNーTerminal アミノacid sequenceをdeterminationしたところMet-Ser-Leu-Asn-Asp-であった. Escherichia coli Among the C600 strains, there is no trace of the disease. As a result, the activity of グリオオキサラーゼI is about 120 times larger than that of the parent strain. The result of the whole base arrangement of the second にその伝子の全桩base arrangementをdeterminationし、そこからforecastされるNーterminal アミノacid arrangementを検askingしたにPseudomonas Putida's refined enzyme has a complete and uniform terminal enzyme complex. , the legacy of the child is the らかとなった.またグリオキサラーゼI 伝子を Imported した coliform C600 より Refined した enzyme のN ー terminal アミノ acid compositionをdeterminationしたresultSer-Leu-Asn-Asp-であり、NーENDのメチオニンが出されていた.これは Fear of coliform bacteriaーゼによりプロセッシングをReceived けたためと卡えられた. NーTerminal のメチオニンが Remove all properties of されたグリオキサラーゼI The quality is good, and the wild type is worse than the wild type.