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マクロファージ特異的膜タンパク遺伝子、MS2の解析

巨噬细胞特异性膜蛋白基因MS2分析

基本信息

批准号：
63570226
负责人：
山本俊輔
金额：
$ 1.28万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570226/
关键词：
マクロファージ膜抗原cDNA マクロファージ膜抗原遺伝子

项目摘要

研究目的:マクロファージ(Mφ)機能の分子解析を目的としてこれまで種々のMφの膜蛋白や分泌蛋白のcDNAや遺伝子の構造を明かにしてきた。本研究はそのなかの一つ、MS2蛋白遺伝子の解析を目的とした。成果:1.MS2cDNAの塩基配列解析;マウスMS2の転写物は3.1kbでcDNAの5'端の塩基配列がなお末解決であったが、全オープンリーディングフレーム(ORF)を含むcDNAの構造を明らかにした。すなわち、ORFは全長2478bpで826個のアミノ酸をコードし、構造の特徴としてシグナルペプチド、膜外部のシステインリッチドメイン、膜貫通部、細胞質部のプロリンリッチドメインを含むことが判明した。2.MS2遺伝子の塩基配列検索;マウスのMS2遺伝子を含むEMBL3ファージクローンを分離し、塩基配列の決定を行っている。すでに、細胞膜外部の殆どの領域の配列を決定したが、この部のみで約6500bpの長さを持ち、長短の多数の(10個)イントロンを含む特有な構造が明らかになりつつある。5'部、膜貫通部および細胞質部の塩基配列検索を目下継続中である。転写開始部上流の転写調節領域の構造ならびに調節蛋白の検索を行うことも計画している。3.MS2ペプチド抗体の作成;MS2蛋白の膜外部および細胞質部の数ケ所の親水性アミノ酸配列部についてペプチドを合成し、これらに対するウサギ抗体を作成した。これらを用いてFACSによる検索、PAP法による光顕的、電顕的検索およびO'Farrell法による解析などを開始している。4.MS2遺伝子の発現;LPS,INF_γ,MDP,TPAなどの種々の刺激因子により本遺伝子の転写亢進が起こる。この他の刺激因子も加えinvivoおよびinvitroにおける刺激効果をより詳細に検討中である。5.マウスMS2cDNAを用いてヒトMφcDNAライブラリーによりこれに対応するcDNAクローンを得、その塩基配列を検索中である。

Objective: To elucidate the molecular structure of membrane protein and secretory protein of Mφ. The aim of this study is to analyze MS2 protein. Results: 1. Sequence analysis of MS2 cDNA; 3.1 kb sequence of MS2 cDNA; 5'sequence of MS2 cDNA; The total length of ORF is 2478bp, 826 amino acid residues, structural characteristics, membrane outer region, membrane penetrating region and cytoplasmic region are identified. 2. The base alignment of MS2 gene is determined by EMBL3. In addition, the arrangement of the outer part of the cell membrane is determined by the length of about 6500bp, the length of most (10) of the cells, including the unique structure. 5'-part, membrane-penetrating part and cytoplasmic part The structure of the upstream regulatory domain in the initial part of the genome and the expression of regulatory proteins are planned. 3. Preparation of MS2 protein antibody; preparation of MS2 protein antibody in the outer membrane and cytoplasmic part of the hydrophilic acid alignment part This analysis begins with FACS, PAP, optical, electrical and O'Farrell methods. 4. MS2 gene expression;LPS,INF_γ,MDP,TPA and other stimulating factors. This stimulation factor is added in vivo. The stimulation effect is discussed in detail. 5. MS2 cDNA is used in the identification of MφcDNA fragments.