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オステオポンチンーガン転移における意義と発現機序の解析

骨桥蛋白——癌症转移中的意义及表达机制分析

基本信息

批准号：
03152103
负责人：
山本俊輔
金额：
$ 2.94万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)リコンビナントオステオポンチン(rOP)の分離:マウスおよびヒトOPcDNAを種々のベクタ-で発現を試みた。マウスではpETで発現をみたが、発現が弱く、利用出来る程のrOPは得られなかった。現在、他のベクタ-で発現を試みている。ヒトではpETで大量発現し、これをHPLCで精製した。さらにGRGDSのDをEに変異させた蛋白の発現を試みている。2)rOPによるガン細胞の接着実験:BSA,OP,フィブロネクチン(FN),合成ペプチドGRGDSを塗布乾燥したマトリクスを用いてB16およびMφ株P388D1の付着を観察し、rOPにはFNに匹敵する活性が存在することを確認した。OP処理B16細胞のOP,FN,GRGDSに対する付着の抑制がおこることも観察した。3)ハプトタキシス(HT)におけるrOPの作用:rOP処理ポリカ-ボネ-ト膜(孔径5〜8μ)でのB16のHTは見られない。GRGDSも同様である。FNには濃度依存的にHT活性が見られる。FN処理膜を用い、Boyden装置の下室にrOPを入れるとHTの抑制が認められた。FN処理膜をrOPで再処理すると強い抑制が見られた。また、B16をrOPで処理した場合にもHTの抑制が見られた。現在肺転移巣から高転移性クロ-ンの選別を行っており、rOPを用いたin vivo実験はこれを用いて行う予定である。また、抗rOP抗体を作成し、特異性を確認した。4)OPトランスジェニックマウス(TM)の作成:メタロチオネインプロモ-タ-を連結したマウスOP遺伝子を作成し、BALB/cマウスのTMを作出中である。すでに数匹の出産をみたが、ゲノムDNAのPCRによる検定はこれからである。5)OP遺伝子の発現機序解析:すでにマウスOPゲノム遺伝子の転写開始部上流約3kbの塩基配列を決定した。また、ヒトOPゲノム遺伝子の塩基配列の検索も行っている。これらのプロモ-タ-領域をクロラムフェニコ-ルアセチルトランスフェラ-ゼベクタ-に入れ、ガン細胞における特異的転写およびTPAによる転写亢進に関与するシスエレメントを検討している。

1) The separation of ROP (ROP): ROP (ROP) and ROP (ROP). It's not easy to find a way out. Now, he's trying to figure out what to do. A large amount of pET was produced and purified by HPLC. Today's GRGDS protein production test 2) rOP cell adhesion: BSA, OP, FN, synthetic GRGDS coated and dried with B16 and M φ strain P388D1 was observed and confirmed to have activity comparable to FN. OP treated B16 cells were inhibited by OP, FN, GRGDS. 3) The role of rOP in the treatment of B16 and HT: rOP treatment of B16 and HT in the treatment of B16 and HT. GRGDS. FN is not concentration-dependent HT activity. FN treatment membrane is used in the lower chamber of Boyden device. FN treatment membrane rOP retreatment HT suppression can be seen in the case of B16 rOP. Now the lung shift is very high, and the selection of rOP in vivo is very high. Anti-rOP antibodies were prepared and specificity confirmed. 4) OP (TM) The number of DNA samples was determined by PCR. 5) The sequence analysis of OP gene expression: the sequence of OP gene expression is determined by the sequence of 3 kb upstream from the beginning of OP gene expression. In addition to the above, it is also necessary for the OP to implement the implementation of the basic arrangement of the software. This article discusses the relationship between TPA and the development of a new type of cellular communication system.