生体情報分子として機能する糖鎖抗原とその作用機構

作为生物信息分子的糖链抗原及其作用机制

• 批准号: 12033218
• 负责人: 中田 博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto Sangyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12033218/
• 关键词: ムチン; 腹腔マクロファージ; マウススカベンジャーリセプター; ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター

マウス腹腔マクロファージ、ヒト単球由来細胞株THP-1細胞を用いて、ムチン型糖タンパク質(ムチン)による活性化とその影響について検討した。ムチンとしては、ウシ、ヒツジ顎下腺ムチン(BSM,OSM)及びヒト腸癌細胞LS180の培養上清より単離したムチン(M-GP)を用いた。BSM,OSM(100μg/ml)、M-GP(2μg/ml)及び比較のためにLPS(1μg/ml)の存在下で、腹腔マクロファージを培養し、上清に分泌されたサイトカイン(IL-1β、TNF-α)、PGE2をELISAで測定した。サイトカインの産生に関しては、ムチンによる大きな効果は認められなかったが、PGE2については、LPSと同程度の分泌の亢進が認められた。次にムチンの受容体を検討する目的で、マクロファージの可溶化物をBSM-セファロースに通し、十分に洗浄後、1M塩化ナトリウムを含む溶液で溶出した。溶出液を脱塩後、非還元条件でSDS-PAGEを行い、ウエスタンブロットを行った。抗マウススカベンジャーリセプター抗体で検出したところ、主に同リセプターの2量体と3量体の位置に検出された。また、同リセプターのcDNAをトランスフェクトしたCHO細胞についても同様の結果を得た。従って、スカベンジャーリセプターを介してマクロファージが活性化されることがわかった。THP-1細胞については、ムチンによる活性化に伴うウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターの産生について検討した。BSM存在下で、3-24時間培養後、RNAを調製し、RT-PCRにより検討した結果、約8時間後に著しい誘導が認められた。上皮性癌組織に浸潤したマクロファージにおいても同様の現象がおこっているものと考えられ、癌細胞にとって有利な環境をもたらすものと考えられる。

The study of the effects of different enzymes on the activity of THP-1 cells was carried out. The culture supernatant of LS180 cells was isolated from the culture supernatant of LS180 cells. In the presence of BSM,OSM(100μg/ml), M-GP(2μg/ml), and LPS(1μg/ml), the supernatant was cultured and secreted by ELISA. The secretion of PGE2, LPS and other substances is related to the secretion of PGE2, LPS and other substances. For the purpose of the study of the receptor, the solubilized substance of BSM was dissolved in the solution containing BSM, and the solubilized substance of BSM was dissolved in the solution containing BSM. SDS-PAGE was performed under non-reductive conditions after elution. Anti-virus antibodies are detected in the presence of 2 molecules and 3 molecules. The same cDNA sequence was obtained in CHO cells. The first time I saw him, I saw him. THP-1 cells are activated in the presence of a host cell. In the presence of BSM, 3-24 hours after incubation, RNA modulation, RT-PCR detection results, about 8 hours after induction Epithelial cancer is a common phenomenon.

项目成果

S.V.Guerre et al.: "Short synthetic glycopetides successfully induce antibody responses to carcinoma-associated Tn antigen."J.Peptide Res.. 55. 173-180 (2000)

S.V.Guerre 等人：“短合成糖肽成功诱导对癌相关 Tn 抗原的抗体反应。”J.Peptide Res.. 55. 173-180 (2000)

E.Osinaga et.al.: "Analysis of the fine specificity of Tn-binding proteins using synthetic glycopeptide epitopes and a biosensor based on surface palsmon resonance spectroscopy."FEBS Letters. 469. 24-28 (2000)

E.Osinaga 等人：“使用合成糖肽表位和基于表面等离子体共振光谱的生物传感器分析 Tn 结合蛋白的精细特异性。”FEBS Letters。

M.Inoue et al.: "High density O-glycosylation of the MUC 2 taudem repeat unit by N-acetyl galactosaminyltransferase-3 in colonic adenocarcinoma extracts."Cancer Res.. (in press). (2001)

M.Inoue 等人：“结肠腺癌提取物中 N-乙酰半乳糖胺基转移酶 3 对 MUC 2 taudem 重复单元进行高密度 O-糖基化。”Cancer Res..（出版中）。