プロティンホスファタ-ゼの活性調節機構の研究

蛋白磷酸酶活性调控机制研究

• 批准号: 01570135
• 负责人: 武田 誠郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570135/
• 关键词: プロテインホスファタ-ゼ; サイクリックAMP依存性プロテインキナ-ゼ; Ca^<2+>リン脂質依存性プロテインキナ-ゼ; C-キナ-ゼ; 代謝調節; 赤血球; 蛋白質のリン酸化-脱リン酸化

プロテインホスファタ-ゼは蛋白性インヒビタ-により阻害されるタイプ1、されないタイプ2A、2B、2Cに分類される。この内2Aの活性調節機構はまだ明らかでない。我々はヒト赤血球細胞質可溶画分に2Aに属する基質特異性の異なるホスファタ-ゼI(Mr=180,000)、III(Mr=177,000)、IV(Mr=104,000)を見出し、これらを均質に精製した。サブユニット構造はIがα_1β_1λ_1、IIIがα_1β_1γ_1、IVがα_1β_1と推定された。SDS-PAGEで算出した分子質量はαが34KDa、βが63KDa、λが53KDa、δが74KDaである。αが触媒サブユニットで、β、λ、δは調節サブユニットとして各酵素に固有の基質特異性、2価金属イオン要求性を与える。ホスファタ-ゼI、III、IVをMg^<2+>、ATP共存下に、サイクリックAMP依存性プロテインキナ-ゼ(A-キナ-ゼ)、Ca^<2+>リン脂質依存性プロテインキナ-ゼ(C-キナ-ゼ)、Ca^<2+>-カルモジュリン依存性プロテインキナ-ゼII、ホスホリラ-ゼキナ-ゼ、ミオシン軽鎖キナ-ゼ、カゼインキナ-ゼIとそれぞれインキュベ-トすると、ホスファタ-ゼIのδサブユニットの特定のセリン残基のみが定量的にA-キナ-ゼとC-キナ-ゼによってリン酸化された。他のプロテインキナ-ゼはいづれのサブユニットもリン酸化しない。A-キナ-ゼによるリン酸化反応におけるホスファタ-ゼIに対するKm値は0.27μMで赤血球内ホスファタ-ゼIの推定濃度とほぼ等しい。δサブユニットのリン酸化により、ホスファタ-ゼIのホスホリラ-ゼa、P-H1ヒストン、P-H2Bヒストンの脱リン酸化活性は約1.5倍促進され、この酵素の活性調節にA-キナ-ゼとC-キナ-ゼの関与が示唆され、細胞内情報伝達終止の一機構と推測された。

プ ロ テ イ ン ホ ス フ ァ タ - ゼ は protein sexual イ ン ヒ ビ タ - に よ り resistance against さ れ る タ イ プ 1, さ れ な い タ イ プ 2 a, 2 b, 2 c に classification さ れ る. The active regulatory mechanism of 2A <s:1> in <s:1> まだ Ming ら ら でな でな まだ. I 々 は ヒ ト red blood cell cytoplasm soluble painting に 2 a に genera す る substrate specificity の different な る ホ ス フ ァ タ - ゼ I (Mr = 180000), III (Mr = 177000), IV (Mr = 104000) を see し, こ れ ら を homogeneous に refined し た. サ ブ ユ ニ ッ ト tectonic は I が alpha _1 beta _1 lambda _1, が alpha beta _1 _1 gamma _1 III and IV が alpha _1 beta _1 と presumption さ れ た. Sds-page で calculate し た molecular mass は alpha が 34 kda, beta が 63 kda, lambda が 53 kda, delta が 74 kda で あ る. Alpha が catalyst サ ブ ユ ニ ッ ト で, beta, lambda, the delta は regulating サ ブ ユ ニ ッ ト と し て each enzyme に natural の substrate specificity, 2 価 metal イ オ ン を sex with え る. ホ ス フ ァ タ - ゼ I, III, IV を Mg ^ 2 + < >, ATP に under the coexistence, サ イ ク リ ッ ク AMP dependency プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ (A - キ ナ - ゼ), Ca ^ 2 + > < リ ン lipid dependency プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ (C - キ ナ - ゼ), Ca ^ 2 + > < - カ ル モ ジ ュ リ ン dependency プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ II, ホ ス ホ リ ラ - ゼ キ ナ ゼ, ミ オ シ ン 軽 lock キ ナ ゼ, カ ゼ イ ン キ ナ - ゼ I と そ れ ぞ れ イ ン キ ュ ベ - ト す る と, ホ ス フ ァ タ - ゼ I の delta サ ブ ユ ニ ッ ト の specific の セ リ ン residues の み が quantitative に A - キ ナ - ゼ と C - キ ナ - ゼ に よ っ て リ ン acidification さ れ た. He <s:1> プロテ キナ キナ-ゼ づれ づれ づれ <s:1> サブユニット リ リ リ <s:1> acidification な な. A - キ ナ - ゼ に よ る リ ン acidification anti 応 に お け る ホ ス フ ァ タ - ゼ I に す seaborne る Km numerical は 0.27 mu M で red blood corpuscle ホ ス フ ァ タ - ゼ の I presumed concentration と ほ ぼ etc し い. Delta サ ブ ユ ニ ッ ト の リ ン acidification に よ り, ホ ス フ ァ タ - ゼ I の ホ ス ホ リ ラ ゼ a and P - H1 ヒ ス ト ン, P - H2B ヒ ス ト ン の リ off ン acidification active は about 1.5 times promote さ れ, こ の の enzyme activity regulating に a - キ ナ - ゼ と C - キ ナ - ゼ の masato and が in stopping さ れ, intracellular intelligence 伝 termination の と speculation さ one institution Youdaoplaceholder0.

项目成果

Hirofumi Usui: "Three distinct forms of type 2A protein phosphatase in human erythrocyte cytosol" Journal of Biological Chemistry. 263. 3752-3761 (1988)

Hirofumi Usui：“人红细胞胞浆中 2A 型蛋白磷酸酶的三种不同形式”《生物化学杂志》。

Haruhisa Tsukamoto: "Tyrosine protein kinases in membrane fractions from rat cerebral cortex" Journal of Biochemistry. 104. 807-816 (1988)

Haruhisa Tsukamoto：“大鼠大脑皮层膜组分中的酪氨酸蛋白激酶”生物化学杂志。

Kazuyoshi Azuma: "Purification and characterization of protooncogene c-yes products,p60^C-yes from rat liver P_2 membrane fraction" Journal of Biological Chemistry.

Kazuyoshi Azuma：“大鼠肝脏 P_2 膜组分中原癌基因 c-yes 产物的纯化和表征，p60^C-yes”《生物化学杂志》。

Hirofumi Usui: "Phosphorylation of 74kDa δ subunit in a human erythrocyte type 2A protein phosphatase by cAMPーdependent protein kinase" FEBS Letter.

Hirofumi Usui：“cAMP 依赖性蛋白激酶对人红细胞 2A 型蛋白磷酸酶中 74kDa δ 亚基的磷酸化”FEBS Letter。