ヒト赤血球プロテインホスファターゼ2Aの活性制御機構の研究

人红细胞蛋白磷酸酶2A活性调控机制研究

基本信息

  • 批准号:
    07670145
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ヒト赤血球可溶画文よりサブユニツト構造の異なる4種のプロテインホスファターゼ2A(PP2A);α_1β_1,α′_1β_1、α_1β_1γ_1、α_1β_1δ_1を分離精製した。αとα′(34kDa)は触媒サブユニツトで、β(63kDa)、γ(53kDa)、δ(74kDa)は調節サブユニツトである。1)PP2Aの触媒サブユニツトに含まれる2価金属イオンの同定:αとα′は蛋白化学的に区別出来ない。αは2価金属イオンが無くとも活性があり、Mg^2+またはMn^2+によって活性化を受ける。α′は完全にMn^2+依存性でMg^2+のみではほとんど活性がない。αにはこれらの2価金属は含まれないが,等モルのZnと0.3モルのFeが検出された。α′にはこれらの金属は検出されなかった。2)PP2Aホロ酵素、α_1β_1δ_1の再構成によるδの機能分解:α_1β_1δ_1をヘパリン-セファローズカラムを用いてα_1β_1とδ_1に分離し、両者を食塩存在下で混和し、ホロ酵素を再構成した。各種リン酸化タンパク室を基質としたα_1β_1のホスファターゼ活性はδが結合することにより20-64%抑制された。この性質を利用してδの定量法を確立した。3)74kDaδのcDNAの単離と推定一時構造:δの部分アミノ酸配列に基づいて、ヒト大脳皮質cDNAライブラリーからδをコードするcDNAを単離した。この塩基配列からδは570個のアミノ酸からなる分子量66万の蛋白質と推定された。δの一次構造はPP2AのB′サブユニットとの類似性が認められた。δにはAキナーゼ、Cキナーゼによるリン酸化部位のコンセンサス配列が複数存在し、N末端側にはPQ繰り返し配列、C末端側に核移行シグナル、SH3との結合部位のコンセンサス配列が存在した。ノーザン・ブロットで調べた全ラット組織に約2.9kbのδのmRNAの発現を認めた。これはウエスタン・ブロットによるδの組織分布と一致した。
The soluble structure of erythrocytes is composed of four kinds of isoforms: α_1β_1,α′_1β_1, α_1β_1γ_1 and α_1β_1δ_1.α′(34kDa), β(63kDa), γ(53kDa), δ(74kDa), 1)PP2A catalyst contains 2 metals, α α protein chemistry.α 2 + is the most active metal in the world, Mg^2 + is the most active metal in the world.α′ is completely Mn^2+ dependent, Mg^2+ is not active.α,α′2) Functional decomposition of PP2A enzyme, α_1β_1δ_1 reconstitutions:α_1β_1δ_1 reconstitutions, α_1β_1 δ_1 reconstitutions. A variety of acid matrix α_1β_1 and α_2 β_1 α_2 α_3 β_3 α_4 α_5 α_6 αThis property is established by quantitative method. 3)74kDa delta cDNA fragment was isolated from the putative temporal structure: delta fragment was partially isolated from the nucleotide sequence, and the cDNA fragment was isolated from the genomic DNA sequence. The molecular weight of the protein was estimated to be 660,000. The first order structure of δ is PP2A and B′. The nucleotide sequence of the acid site is plural at the A and C terminal, PQ at the N terminal, nuclear migration at the C terminal, and nucleotide sequence of the binding site at the SH terminal. The expression of delta mRNA was identified in a 2.9 kb DNA fragment. The tissue distribution of

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Osamu Tanabe: "Molecular cloning of a 74-kDa regulatory subunit(B″ or δ)of human protein phosphatase 2A" FEBS Letters. 379. 107-111 (1996)
Osamu Tanabe:“人蛋白磷酸酶 2A 74 kDa 调节亚基(B”或 δ)的分子克隆”FEBS Letters 379. 107-111 (1996)。
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