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毒素原性大腸菌耐熱性下痢毒素の受容体とグアニレ-トシクラ-ゼ活性化機構

产毒大肠杆菌热稳定腹泻毒素受体及鸟苷酸环化酶激活机制

基本信息

批准号：
01570229
负责人：
平山壽哉
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

STh受容体の精製と構造解析を中心に研究を進めた。ラットの小腸上皮細胞から刷子縁細胞膜を調製し、各種の界面活性剤を用いてSTh受容体の可溶化を試みた結果、0.1%Lubrol PXがもっともSTh受容体を効率よく可溶化することがわかった。そこで、Lubrol PX処理して得られた粗STh受容体を濃縮後、Sephacryl S-300HR カラムクロマトを行った。分子量200,000を示す画分にフォトアフィニテイラベリングでSThと結合する。3種類の蛋白が検出れた。この3種の蛋白のSDS-polyacrylamide電気泳動により求まる分子量は53,000、70,000、77,000であり、ゲル濾過法によって求めた分子量の値200,000より小さく、STh受容体がいくつかのサブユニットから抗生されていることを示唆していた。ここで得たSTh受容体画分をCon A Sepharoseカラムクロマト行いさらに精製したところ、0.5M α-methylglucosideと1.3M α-methyl-mannosideによって溶出されるSTh受容体とに分離された。そこで最もSThと強く結合する70kDa蛋白を含む画分、1.3M α-methyl-mannoside画分に溶出されたSTh受容体をSTR-200Aとし、0.5M α-methylglucosideで溶出されたSTh受容体をSTR-200Bとした。STR-200BはSThと結合する二つのサブユニット(53kDa蛋白と77kDa蛋白)を有していた。従ってラットの腸管膜のSTh受容体は2種類ありいずれも糖蛋白であることが示唆された。興味深いことにSTR-200AとSTR-200Bの糖鎖は異なっており、STR-200Aの糖鎖はN-linked high mannoseタイプで、STR-200Bの糖鎖はN-linked complexタイプであった。現在STR-200Aの3本の糖鎖はSThとの結合に関与しないことがわかっている。またSTR-200AとSTR-200Bにはグアニレイトシクラ-ゼ活性は検出されていない。STh受容体精製の方法としてSThの活性アナロ-グにビオチンを3分子結合させたリガンドを作成し、これを用いたアフィニテイクロマトが有効であることがわかった。

STh receptor refinement and structural analysis center research The results of the solubilization test of STh receptor with various interfacial active agents showed that 0.1% Lubrol PX could be used to modulate the membrane of intestinal epithelial cells. After treatment with Lubrol PX, the crude STh receptor was concentrated, and Sephacryl S-300HR was prepared. Molecular weight: 200,000 Three kinds of protein were detected. The molecular weights of these three proteins are 53,000, 70,000 and 77,000 respectively, and the molecular weights of these proteins are 200,000 and 200,000 respectively. The STh receptor was purified by ConA Sepharose, 0.5M α-methylglucoside and 1.3M α-methyl-mannoside. The most strongly bound 70kDa protein was dissolved in STR-200A and 0.5 M α-methylglucoside in STR-200B. STR-200B has the ability to bind STh to two proteins (53kDa protein and 77kDa protein). There are two kinds of receptors in the intestinal membrane: glycoproteins and proteins. STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200B STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200B STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200A STR-200B STR-200B STR-200A STR-200B STR-200B STR-20A STR-200A STR-200A STR-200 Now STR-200A and 3 of the sugar lock is STh and combine with each other. STR-200A and STR-200B are both active. A method for refining STh receptors is described. The activity of STh is determined by the combination of three molecules.