腎における尿酸輸送担体のクロ-ニングとその解析

肾脏尿酸转运蛋白的克隆与分析

• 批准号: 01570355
• 负责人: 野島 美久
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570355/
• 关键词: 痛風; 高尿酸血症; 尿酸輸送担体; 遺伝子クロ-ニング

痛風に代表される高尿酸血症は、ただ単に関節疾患にとどまらずむしろ動脈硬化を増悪させる因子として、疾患の欧米化がおきているわが国においては今後最も重要な研究課題になると思われる。高尿酸血症の成因は、尿酸生成の増加あるいは腎臓よりの尿酸排泄の低下であるが、その頻度から後者が圧倒的に問題となる。従って、尿酸排泄を担う分子の同定およびその遺伝子診断は現在のわが国において必須の課題といえる。ヒトの腎臓をmRNA抽出用の臓器とするには、材料の入手が困難であるため、まずラットの腎臓よりその尿酸担体の遺伝子をクロ-ニングし、これをプロ-ブとしてヒトのDNAをクロ-ニングする方法をとった。ラットの腎臓を採取後液体窒素の中で瞬時に凍結し、これより通常の方法でRNAを精製した。このRNAをオリゴ-dTカラムにかけることによりポリ(A)^+-RNAを精製した。このRNAの分解が最小限に抑えられていることは、RNAブロットを行いマウスのMHCクラスI(H-2K^d)の遺伝子である191-6のHindIIIフラグメントが約1.9kbのところにクロスハイブリタイズすることにより確認された。このRNAをXenopus oocyteに微量注入し蛋白を発現させた後に、この中に尿酸の担体となり得るものが存在するかを放射標識した尿酸(^<14>C-Urate)とoocyteを反応させることによりスクリ-ニングした。コントロ-ルと比較してRNAを注入したoocyteにおいては約20%から50%の放射活性の取り込みの上昇が認められたが、時にバックグラウンドと同程度のこともありシグナルが非常に弱いことが考えられた。従って次にこのRNAをショ糖密度勾配によりいろいろな大きさに分画しこれをoocyteに注入し同様の方法により検索したところ、コントロ-ルに比較して2^-3倍に取り込みが増加するフラクションが存在したが、oocyteのロット毎の蛋白発現性が非常に異なり、この方法すなわちショ糖密度勾配によるRNAのフラクショネ-ションの応用を困難にしているのが現状である。

Pain is the most important research topic in the future: hyperuricemia, hyperuricemia. The cause of hyperuricemia, uric acid production plus uric acid production, uric acid excretion, low uric acid excretion and low uric acid excretion. The molecules responsible for uric acid excretion and uric acid excretion are the same as those responsible for uric acid excretion and uric acid excretion. The mRNA extraction device was used to extract the uric acid carrier, and the material was used to obtain the uric acid carrier. The uric acid carrier was loaded with the uric acid carrier. The uric acid carrier was loaded with the uric acid carrier. The uric acid carrier was loaded with the uric acid carrier. After the liquid asphyxiant was collected, the liquid asphyxiant was immediately checked. The usual method was to use the RNA method. "RNA", "dT", "please", "RNA", "" (A) ^ +-"fine". "RNA" decomposes the minimum limit, and RNA breaks down the line. "MHC", "I (H- 2K ^ d)", "son", "191K ^ d", "HindIII", "I", "1.9kb", "I", "H2K ^ d". After microinjection of the protein into the RNA Xenopus oocyte, the uric acid carrier in the protein was detected. The uric acid carrier was detected. There was a radiation marker, uric acid (^ & lt;14>C-Urate), oocyte. The radioactivity of 20%, 50%, 50%, 50%, 20%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 20%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50 The second time, the RNA, the sugar density, the sugar density, the sugar density The method is to match the sugar density with the sugar density profile. The sugar density is RNA.

项目成果

野島美久: "抗Sm抗体と抗リボゾ-ムP蛋白抗体ル-プスサイコ-シスとの関連において" 日本臨床免疫学会総会抄録集. 17. 130 (1989)

Miku Nojima：“与狼疮精神病有关的抗 Sm 抗体和抗核糖体 P 蛋白抗体”日本临床免疫学会大会记录，17. 130 (1989)。

野島美久: "抗Sm抗体のリボゾ-ム蛋白に対する交差反応性" 日本リウマチ学会総会. 33. 316 (1989)

Miku Nojima：“抗 Sm 抗体与核糖体蛋白的交叉反应”日本风湿病学会全体会议 33. 316 (1989)。

野島美久: "IDENTIFICATION OF AN ACIDIC RIBOSOMAL PROTEIN REACTIVE WITH ANTI-Sm AUTOANTIBODY" Journal of Immunology. 143. 1915-1920 (1989)

Miku Nojima：“与抗 Sm 自身抗体反应的酸性核糖体蛋白的鉴定”免疫学杂志 143。1915-1920 (1989)