肝小胞体膜の形成機構の研究

肝内质网膜形成机制的研究

• 批准号: 01580196
• 负责人: 三原 勝芳
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580196/
• 关键词: 小胞体膜; チトクロ-ムP-450; エステラ-ゼ; 膜生合成; シグナルペプチド

ER膜に局在するチトクロ-ムP-450(P-450と省略)ならびにERの内腔面にゆるく結合して存在するカルボキシエステラ-ゼE1(E1と省略)を対象としてER膜への蛋白質の挿入と仕分けの機構を明らかにすべく実験をおこない次の結果を得た。(1)P-450のER膜挿入シグナルの解析-P-450は分子のN末端の限られた領域にSRPに依存してERにタ-ゲッティングされる領域とERへのアンカ-に必要な領域とが共存している(シグナル/アンカ-配列と省略)。このシグナル/アンカ-配列の機能を決定する要因を明らかにするためP-450LM6とM1という2種のP-450について解析をおこなった。シグナル/アンカ-配列のN末端には酸性アミノ酸が存在するのでこれを塩基性アミノ酸に置換したところ、分泌シグナルに変換した。又疎水領域を部分的に除去してもやはり分泌シグナルに変換した。これらの実験よりシグナル/アンカ-の機能はN末端の荷電アミノ酸と疎水領域の大きさとのバランスによって決定されると結論した。(2)E1とER膜との相互作用-E1は分泌蛋白質と同様にシグナルペプチドの切断を伴ってER内腔に輸送されるが分泌されずにER内にとどまる。現在各種欠損変異cDNAをCOS細胞で発現させその細胞内分布を解析しERに止まるのに必要な領域の特定をおこなっている。

ER membrane に bureau in す る チ ト ク ロ ム - P - 450 (P - 450 と omitted) な ら び に ER の lumen surface に ゆ る く combining し て exist す る カ ル ボ キ シ エ ス テ ラ - ゼ E1 (E1 と omitted) を like と seaborne し て ER membrane へ の protein の scions into と shi points け の institutions を Ming ら か に す べ く be 験 を お こ な い times の results を た. (1) P - 450 の scions into the ER membrane シ グ ナ ル の parsing - P - 450 molecular の は N terminal の limit ら れ た field に SRP に dependent し て ER に タ - ゲ ッ テ ィ ン グ さ れ る field と ER へ の ア ン カ - に necessary な field と が coexistence し て い る (シ グ ナ ル / ア ン カ - match column と omitted). こ の シ グ ナ ル / ア ン カ - match column の function を す る by を Ming ら か に す る た め P - 450 lm6 と M1 と い う two の P - 450 に つ い て parsing を お こ な っ た. シ グ ナ ル / ア ン カ - match column の N terminal に は acid ア ミ ノ acid が exist す る の で こ れ を salt basic ア ミ ノ acid に replacement し た と こ ろ, secrete シ グ ナ ル に variations in し た. The に in the を part of the 疎 water domain is removed from the <s:1> て に や や た た を secrete シグナ シグナ に to change the た. こ れ ら の be 験 よ り シ グ ナ ル / ア ン カ - の function は N terminal の charged ア ミ ノ acid と 疎 の big water field き さ と の バ ラ ン ス に よ っ て decided さ れ る と conclusion し た. (2) E1 と ER membrane と の interaction - E1 は と secreted proteins with others に シ グ ナ ル ペ プ チ ド の cut を with っ て ER lumen に conveying さ れ る が secretion さ れ ず に ER within に と ど ま る. Now various owe loss - different cDNA を COS cell で 発 now さ せ そ の intracellular distribution を parsing し ER に check ま る の に な necessary domain specific を の お こ な っ て い る.

项目成果

T.Sato: "The amino-terminal structures that determine topological orientation of cytochrome P-450 in microsomal membranes" EMBO.J.(1990)

T.Sato：“决定微粒体膜中细胞色素 P-450 拓扑方向的氨基末端结构” EMBO.J.(1990)