グルタチオン・トランスフェラ-ゼP遺伝子の肝癌特異的発現機構

肝癌特异性谷胱甘肽转移酶P基因表达机制

基本信息

批准号：
02152022
负责人：
村松正實
金额：
$ 4.48万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は1)GSTーP遺伝子の主たるエンハンサ-,GPEーIの構造と機能、2)GSTーP遺伝子に存在するサイレンサ-の構造と機能,および3)もう一つのエンハンサ-GPEIIの再検討、を推進した。1)についてはcーjunが無いとされる胎児性幹細胞F9を用いても、cーjunが十分に存在するHeLa細胞においても2つのTPA応答配列(TRE)から成る特徴的な回文構造が必要であり、どちらの細胞でも単一のTREに比べて遥かに高い活性を持つことが証明された。GPEIに働くトランス作用因子がcーjunではないらしいこと,および肝発癌早期におけるGSTーPの上昇が、その頃起こるcーjunの上昇のみによるものでないことは、次の3点から推察される。1)初代培養肝細胞へcーjunを発現させても、同時に入れたGSTーP遺伝子は活性化されない。2)cーjunがないとされるもう一つの細胞,C127線維芽細胞を用いてもGPEIは十分にエンハンサ-活性を示す。3)cーjunに拮抗すると考えられる△FosBを同時に入れてやってもGPEIのエンハンサ-活性は抑えられない。以上の理由から、GPEIに結合する新しいトランス作用因子の存在を推定しその同定精製を急いでいる。2)についてはGSTーP遺伝子の上流ー100からー400の間に数ケ所のサイレンサ-様シスエレメントがあり、少くとも2種類以上のタンパク質が特異的に結合する事を見出した。その一つSFーAは高度に精製され、上記サイレンサ-領域以外にもTATAーboxと転写開始点の間にも結合することが明らかとなった。現在この因子のクロ-ニングを急いでいる。3)に関しては、数種類の細胞に導入して調べたが、何れの場合もかなり低い活性しか得られず、GPEIIは特殊な場合のみ働くエンハンサ-なのかも知れない。なおこの他の領域には現在の所強力な制御領域は見つかっていない。1)および2)の諸点に関して更に研究を続けている。

今年，我们促进了1）GST-P基因的主要增强子的结构和功能，GPE-I，2）GST-P基因中存在的消音器的结构和功能，以及3）再次重新验证另一个增强剂GPEII。对于1），即使使用据说不含C-Jun的胎儿干细胞F9，在C-Jun足够的HELA细胞中，由两个TPA响应序列（TRE）组成的特征性静脉结构也需要足够，并且证明两种细胞的活性都比单个TRE高得多。可以从以下三个点推断出，对GPEI作用的跨作用因子不是C-JUN，并且在肝癌早期阶段GST-P的增加并不仅仅是由于该时间左右发生的C-JUN的增加。 1）C-Jun在原代培养的肝细胞中的表达不会激活同时放置的GST-P基因。 2）GPEI还具有未经C-Jun的另一个细胞C127成纤维细胞表现出足够的增强剂活性。 3）即使被认为可以抵消C-JUN的FOSB同时也用于防止GPEI增强剂活性。由于上述原因，我们正在推断出一种与GPEI结合并急于识别和净化它的新型跨作用剂的存在。关于2），我们发现GST-P基因上游的100至400之间存在几种沉默的顺式元件，并且至少有两种或多种类型的蛋白质专门结合。 SFA之一已被高度纯化，并且已被证明不仅与上述消音区域结合，还与Tatabox和转录起始点结合。我们目前急于克隆这个因素。关于3），我们通过将其引入几种类型的细胞来研究它，但是在每种情况下，只能获得相当低的活性，而GPEII可能是仅在特殊情况下起作用的增强子。但是，在其他地区没有发现强大的控制区域。关于1）和2）的问题进行了进一步的研究。