転写抑制性に作用するエンハンサ-結合因子PEBP4のcDNAクロ-ニングー癌抑制への関与を探る

PEBP4（一种作用于转录抑制的增强子结合因子）的 cDNA 克隆 - 探索其在癌症抑制中的作用

基本信息

批准号：
02152050
负责人：
佐竹正延
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

PEBP4は、未分化F9細胞で転写抑制性に作用する、シスエレメントに結合する因子として同定された。本因子はF9細胞のみならず、種々の分化した細胞にても発現している。本因子による転写抑制作用の機構、及び細胞分化・癌化における意義を解明する目的で本研究が行なわれた。(1)PEBP4の分子的性状。ラット肝の核抽出液を出発材料として用い、通常の生化学的分離法・塩基配列特異的DNAアフィニティクロマトグラフィ-により、PEBP4を精製した。精製標品のSDSーPAGEにより、分子量60kD・65kDの2つのポリペプチドが、各々等モル比で主要バンドとして観察された。一方ゲル3過においてPEBP4活性は、分子量130kDの位置に溶出された。またホルムアルデヒド処理により、PEBP4をDNAに架橋すると、SDSーPAGE上やはり分子量130kDの位置にバンドが検出された。以上からPEBP4は、60・65kDの2つのポリペプチドのダイマ-であると考えられる。(2)PEB14のDNA塩基配列の認識モ-ドについて。種々の変異を導入したDNAをプロ-ブとして、PEBP4の結合を検討した結果、PEBP4の認識配列はC/TCAG(N)_6C/TCAGであると判明した。C/TCAGのモチ-フは2回くり返す必要があり、一方のモチ-フのみに変異を導入すると、PEBP4は結合できない。また介在配列はどの塩基でもよいが、Nの個数は正確に6でなければならない。従って(1)で述べたダイマ-の各々の成分が、1つのモチ-フを認識していると考えられる。現在PEBP4をコ-ドする遺伝子のcDNAクロ-ニングに向けて、引き続き努力しているが、(1)(2)で述べた分子的性状・塩基配列認識モ-ドの点が、PEBP4はステロイドホルモン・レセプタ-と類似した性質を有することが示唆され、その生物学的意義は少さくないと予想される。

PEBP4被鉴定为在未分化的F9细胞中引起转录抑制作用的顺式元素结合因子。该因素不仅在F9细胞中，而且在各种分化细胞中表达。进行了这项研究是为了阐明该因素的转录抑制作用及其在细胞分化和癌症中的重要性。（1）PEBP4的分子特性。使用大鼠肝脏作为起始材料的核提取物，通过常规的生化分离方法和核苷酸序列特异性DNA亲和色谱法纯化PEBP4。通过纯化的制剂的SDS-PAGE，观察到两个分子量为60 kd和65 kd的多肽在等摩尔比中为主要带。另一方面，PEBP4活性在凝胶3期间的分子量为130 kd的位置洗脱。此外，当通过甲醛处理将PEBP4交联至DNA时，在SDS-PAGE上的分子量为130 kd的位置检测到条带。从上面，PEBP4被认为是两个多肽的Dymer，为60和65 kd。（2）PEB14的DNA碱基序列的识别模式。在使用引入各种突变作为探针的DNA检查PEBP4的结合后，发现PEBP4的识别顺序是C/TCAG（N）_6C/TCAG。 C/TCAG基序必须重复两次，如果仅引入一个突变，则不能结合PEBP4。此外，尽管中间序列可以是任何基础，但n的数量必须正好为6。因此，据信（1）中提到的Dymer的每个组成部分都识别一个基序。目前，我们正在继续努力努力克隆PEBP4代码的基因，但是（1）和（2）中描述的分子特性和核苷酸序列识别模式表明，PEBP4具有与类固醇激素受体相似的特性，并且其生物学意义预计将很小。