転写抑制性に作用するエンハンサ-結合因子PEBP4のcDNAクロ-ニングー癌抑制への関与を探る

PEBP4（一种作用于转录抑制的增强子结合因子）的 cDNA 克隆 ​​- 探索其在癌症抑制中的作用

• 批准号: 02152050
• 负责人: 佐竹 正延
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152050/
• 关键词: F9細胞; エンハンサ-; サイレンサ-; 転写制御因子; 遺伝子発現; 細胞分化

PEBP4は、未分化F9細胞で転写抑制性に作用する、シスエレメントに結合する因子として同定された。本因子はF9細胞のみならず、種々の分化した細胞にても発現している。本因子による転写抑制作用の機構、及び細胞分化・癌化における意義を解明する目的で本研究が行なわれた。(1)PEBP4の分子的性状。ラット肝の核抽出液を出発材料として用い、通常の生化学的分離法・塩基配列特異的DNAアフィニティクロマトグラフィ-により、PEBP4を精製した。精製標品のSDSーPAGEにより、分子量60kD・65kDの2つのポリペプチドが、各々等モル比で主要バンドとして観察された。一方ゲル3過においてPEBP4活性は、分子量130kDの位置に溶出された。またホルムアルデヒド処理により、PEBP4をDNAに架橋すると、SDSーPAGE上やはり分子量130kDの位置にバンドが検出された。以上からPEBP4は、60・65kDの2つのポリペプチドのダイマ-であると考えられる。(2)PEB14のDNA塩基配列の認識モ-ドについて。種々の変異を導入したDNAをプロ-ブとして、PEBP4の結合を検討した結果、PEBP4の認識配列はC/TCAG(N)_6C/TCAGであると判明した。C/TCAGのモチ-フは2回くり返す必要があり、一方のモチ-フのみに変異を導入すると、PEBP4は結合できない。また介在配列はどの塩基でもよいが、Nの個数は正確に6でなければならない。従って(1)で述べたダイマ-の各々の成分が、1つのモチ-フを認識していると考えられる。現在PEBP4をコ-ドする遺伝子のcDNAクロ-ニングに向けて、引き続き努力しているが、(1)(2)で述べた分子的性状・塩基配列認識モ-ドの点が、PEBP4はステロイドホルモン・レセプタ-と類似した性質を有することが示唆され、その生物学的意義は少さくないと予想される。

PEBP4 plays an inhibitory role in undifferentiated F9 cells, and its binding factors are also determined. This factor is responsible for the development of F9 cells and their differentiation. The purpose of this study is to clarify the mechanism of this factor's inhibitory effect and its significance in cell differentiation and carcinogenesis (1) Molecular characterization of PEBP4. The extraction of nuclear extract from liver was carried out by the usual biochemical separation method, and the specific DNA was purified by PEBP4. SDS PAGE of refined standard, molecular weight 60kD·65kD, 2-fold separation, each equal to the main separation ratio The activity of PEBP4 was determined by the dissolution of PEBP4 at the position of molecular weight 130kD. In addition, PEBP4 was found bridging DNA during laboratory processing and at positions with a molecular weight of 130kD on SDS-PAGE. The above PEBP4 is 60·65kD and 2 times higher. (2) The understanding of DNA base alignment of PEB14. The results of the study on the binding of PEBP4 and the recognition of PEBP4 in C/TCAG (N)_6C/TCAG showed that the binding of PEBP4 in C/TCAG(N)_6C/TCAG was significantly different from that in C/TCAG(N)_6C/TCAG. C/TCAG-2 is necessary, one is necessary, PEBP4 is necessary. The number of N's in the column is correct. (1) The composition of each component is described in the following paragraphs. Currently, there are many efforts being made to convert the cDNA of PEBP4 into a cDNA gene. The understanding of the properties and nucleotide arrangements of the molecule described in (1) and (2) shows that PEBP4 has similar properties to a standard protein, and its biological significance is unknown.

项目成果

YamaguchiーIwai,Y.: "Differentiation of F9 embryonal carcinoma cells induced by the cーjun and activated cーHaーras oncogenes." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87. 8670-8674 (1990)

Yamaguchi-Iwai, Y.：“c-jun 和激活的 c-Haras 癌基因诱导的 F9 胚胎癌细胞的分化。”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87 (1990)。