权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ペプチド性神経伝達物質サブスタンスPの機能的受容体の同定および性理的意義の解明

肽类神经递质 P 物质功能受体的鉴定及其生理意义的阐明

基本信息

批准号：
02670999
负责人：
仲田義啓
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670999/
关键词：
サブスタンスP 受容体糖鎖レクチンラット中枢神経組織神経化学

项目摘要

[ ^3H]SP特異的結合に対するConcanavalin A(Con A)、lens culinaris agglutinin(LCA),wheat germ agglutinin(WGA)の影響を検討することで、SP受容体の糖鎖構造の性質を調べた。ラット大脳皮質では、Con Aだけが濃度依存的に[ ^3H]SP特異的結合を阻害したのに対し、脊髄では、Con AとWGAが濃度依存的に阻害した。従って、大脳皮質のSP受容体の糖鎖は母核部にαーfucoseの構造を持たない2本鎖複合型糖鎖であり、脊髄SP受容体糖鎖は混成型糖鎖または高マンノ-ス型糖鎖であることが示唆された。レクチンによる阻害効果は、Scatchard plot解析の結果、SP受容体の親和性の低下によるもので、最大結合量には無影響であった。脳及び脊髄膜標本をdigitoninで可容化、ゲル濾過後の可容化膜標本の[ ^3H]SP結合活性に対するGTPγ S及びCon Aの影響を調べた。GTPγ Sは膜標本と同様に[ ^3H]SP結合活性を低下させることから、ゲル濾過後もSP受容体とGTP結合蛋白質(G蛋白)との共役機構が存在することが示唆された。また、Con Aも膜標本と同様に[ ^3H]SP特異的結合を阻害することから、SP受容体はdigitoninにより糖鎖構造を保持した状態で可溶化されると推察された。次に、この画分をConAーSepharoseを用いて精製した結果、Con A部分精製画分では、[ ^3H]SP結合活性に対してGTPγ Sは無影響であることから、SP受容体とそれに共役するG蛋白が分離されたことが示唆された。Con A部分精製画分を、SPーSepharose affinityを行い、SDSーPAGE後、銀染色し精製された蛋白質を調べた。その結果、脳及び脊髄膜標本から還元状態で74Kdの分子量が同一である蛋白質が精製された。またイムノブロッティングの結果、脳及び脊髄膜標本で、SPが74Kdの蛋白質に結合し架橋されたことが確認され、みかけの分子量74Kdの糖蛋白質がSP結合蛋白質(受容体)であることがあきらかになった。

[ ^3H] The effects of SP specific binding on Concanavalin A(Con A), lens culinaris agglutinin(LCA), and wheat germ agglutinin(WGA) were discussed. The concentration dependent binding of SP is inhibited by the concentration dependent binding of WGA. The structure of α-fucose in SP receptor of large cortex is maintained. The structure of α-fucose in SP receptor of large cortex is maintained. The structure of α-fucose in The results of Scatchard plot analysis, low affinity of SP receptor, and no effect on maximum binding amount were obtained. To modulate the effects of digitonin on GTPγ S and Con A on the [ ^3H]SP binding activity of the occluded membrane proteins. GTPγ S is a membrane protein and [ ^3H]SP binding activity. The SP receptor has A sugar lock structure that remains soluble. In addition, the protein was purified by ConA Sepharose, and [ ^3H]SP binding activity was not affected by GTPγ S binding activity. Con A purification, SP-Sepharose affinity, SDS-PAGE, silver staining, protein purification As a result, the protein was purified by molecular weight of 74Kd. The results of the Itamoberotinensis study confirmed that SP binds to and bridges with a protein of 74Kd in the spinal cord membrane, and that the glycoprotein with a molecular weight of 74Kd is an SP-binding protein (receptor).