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車軸藻原形質流動のモ-タ-蛋白質

腋生藻类原生质流的运动蛋白

基本信息

批准号：
02680208
负责人：
藤目杉江
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680208/
关键词：
車軸藻原形質流動ミオシンアクチン滑り運動

项目摘要

車軸藻節間細胞を遠心し、原形質を細胞の一端に集めて取り出す。MgーATP,EGTAを含む溶液中で、原形質中に含まれるモ-タ-蛋白質ミオシンは運動活性を保持している。in vitro motility assayにより、蛍光標織したウサギ骨格筋アクチン線維を約20μm/sと筋肉ミオシンの数倍速い滑り運動を起すことがわかった。このin vitro 運動活性により、種々条件下で運動特性を調べたところ、Ca^<++>添加で可逆的に運動が阻止される。ところが、αーsーATP存在下ではCa^<++>添加で不可逆に運動は停止したまゝであった。この事は、車軸藻ミオシン或はその制御蛋白質のリン酸化が活性を制御していることを示唆する。in vitro運動特性を手がかりに、車軸藻ミオシンの単離精製を試みた。原形質粗抽出液の遠心上清に筋肉アクチンを加え結合性を調べたところ、SDSーPAGEから200ー,175ー,105KDaのバンドが濃くなり、これらポリペプチドが一応候補と考えられた。硫安分画や,DEAE,ゲルろ過等のカラム精製では、何れも運動活性が失われ、それ以上の精製を進めることが出来なかった。アンチ・パン・ミオシン抗体によるウェスタン・ブロットも上記3本の他145,135kDaとも共に弱く反応したため、どのポリペプチドがミオシンか確定出来ず、今後に問題を残したままとなった。蛋白質分解酵素による限定分解で、特定の場所に切断の入った筋肉アクチンを用いて、in vitro運動解析を行ったところ、筋肉ミオシンでは運動性が強く阻害されるにも拘らず、車軸藻ミオシンは未切断アクチンとほゞ同じ速度の運動活性を示した。この事実は、車軸藻ミオシンが筋肉ミオシンと可成り性質を異にするミオシンであることを示す。

The internode cells of axilla are isolated from one end of the protoplast. Mg-ATP,EGTA are contained in solution and in protoplasm, and the activity of protein is maintained. In vitro motility assay, the cursor texture is about 20μ m/s, the muscle texture is about 20μm/s, and the motion is about 20μm/s. In vitro, the activity of the enzyme is regulated by Ca ^++> and reversible by Ca^++>. In the presence of ATP, Ca^<++> is added and irreversible motion is stopped. This activity is controlled by the enzyme or by the enzyme that controls protein acidification. In vitro movement characteristics, the axle structure and the separation of the fine test center The crude extract of protoplasm was extracted from the distal part of the body. The binding property was adjusted to 200-,175-,105 KDa by SDS PAGE. DeAE, DEAE 3. The 145,135kDa protein in the antibody was identified as a weak link in the antibody chain, and the next problem was identified. Proteolytic enzymes are used in limited decomposition, in specific sites, to cut off muscle access, in vitro motion analysis, in muscle access, in locomotion, in strong resistance, in vivo, in axle, in uncut muscle access, in locomotion activity, in vitro, in vitro This is the first time I've ever seen a car.